1. 蛋清样品的准备 

市售新鲜鸡蛋5个，破蛋壳取出蛋清，加入1.5倍体积的0.1 mol/L磷酸盐缓冲液，pH 7.0，搅拌均匀，并调pH 7.0，然后用八层纱布过滤，留取上清液，量取体积并记录，留0.4mL上清液，并加入0.4mL甘油－20℃冻存备用。 

2.阳离子交换层析 

（1）阳离子交换树脂的再生：20g Amberlite-CG-50阳离子交换树脂用0.5mol/L NaOH浸泡30min，水洗至中性，再用0.5mol/L HCl浸泡30min，水洗至中性。 

（2）平衡：在烧杯中将再生好的阳离子交换树脂中用0.1mol/L 磷酸盐缓冲液，pH 7.0平衡。 

（3）吸附：在已平衡好的阳离子交换树脂中加入蛋清样品，搅拌吸附1h（不能用磁力搅拌器）。 

（4）洗涤：倒去其余上清液，树脂用100mL0.1mol/L 磷酸盐缓冲液，pH 7.0洗涤3遍。 

（5）装柱：将树脂搅拌均匀装入2.6cm×30cm层析柱，再用300mL含0.05 mol/L NaCl的0.1mol/L磷酸盐缓冲液,pH7.0洗涤杂蛋白。（装柱前，先检测层析柱是否洁净，保证所有接头密闭、管道畅通；装柱时，流速不得超过3mL/min，全过程不能出现“流干”现象） 

（6）洗脱：用300mL含0.5 mol/L NaCl的0.1mol/L磷酸盐缓冲液,pH7.0以3mL/min流速进行洗脱，合并光吸收高峰管，量取体积并记录，留0.4mL上清液并加入0.4mL甘油－20℃冻存备用。 

3. 硫酸铵沉淀 

每100mL上清液中缓慢加入35g固体硫酸铵，溶解后净置30min，10 000r/min离心10min，沉淀用0.5mL左右含0.1mol/L NaCl的0.1mol/L 磷酸盐缓冲液，pH 7.0溶解，留0.05mL上清液，并加入0.05mL甘油，－20℃冻存备用。 

4. 分子筛层析

将溶解后的硫酸铵沉淀样品10 000r/min离心3min、上光已用pH 7.0  0.1mol/L NaCl的0.1mol/L 磷酸盐缓冲液平衡好的Sephacyl S-100HR柱，洗脱，洗脱流速为15mL／h，分部收集洗脱峰，2mL／管。合并光吸收高峰管。 

5. 透析浓缩 

用含50％甘油的0.1mol/L 磷酸盐缓冲液，pH 7.0透析浓缩4h，－20℃分装冻存备用。