目的 ：

建立微生物鉴定标准操作规程，使其规范化、合理化

范围：

环境监测、生产设备、药品进厂原料及成品微生物检测和水质检测过程中分离得到的微生物及工作菌株。

职责：

1、 质量控制部检验人员对具体操作负责；

2 、质量保证部负责监督本规程的执行。 

内容 ：

1、概述 
微生物是对药品原料、生产环境和成品造成污染的重要因素，也是造成生产失败、成品不合格、直接或间接对人类造成危害的重要因素。因此，对从药品原料、生产环境、检测环境、设备和成品微生物检测过程中分离得到的污染微生物进行鉴定，是十分必要的，也可为检验和生产提供有效的依据。微生物鉴定应遵循逐步缩小的原则，用细菌分类学的知识和操作步骤，逐步将未知微生物落实到科、属、种。 

2 、菌株采集 
从药品原料、成品检验、环境监测和水质检测过程中，采集菌株。 

3 、菌株纯化 
无菌操作用接种环挑取待鉴定菌落或少许含菌液到相应的培养基上划线分离，纯化培养。

4 、鉴定程序

培养特征 ：菌落形态，如形状、大小、色泽、隆起、表面状况、质地、光泽、水溶性色素等。

细胞形态：在显微镜下，仔细观察细胞形态 

形状：如球状、杆状、螺旋状、弧状、丝状及特殊形状。

大小：重要的是细胞的宽度或直径。 

排列：单个、成对、成链或其他特殊的排列方式。

特殊的细胞结构 
鞭毛：有无鞭毛、着生位置及其数量。 

芽孢：有无芽孢、形状、着生位置、孢囊是否膨大。

孢子：孢子形状、着生位置、数量及排列。

运动性：鞭毛泳动、滑动、螺旋体运动方式。 

革兰氏染色反应：呈阳性或阴性

革兰氏染色试验 

原理：革兰氏阳性细菌的细胞壁较厚，细胞壁中的肽聚糖含量高且网格结构紧密，含脂量又低，当用结晶紫复合溶液染色细胞后用脱色剂脱色时，引起了细胞壁肽聚糖层风状结构的孔径缩小以至关闭，阻止了结晶紫－碘复合物的逸出，故菌体呈现深紫色；革兰氏阴性细菌呈现复染液的红色。 

操作：在洁净的载玻片上滴一滴蒸馏水或生理盐水，用接种环挑取少量菌龄为培养18～24小时的菌苔，涂片经火焰固定，加结晶紫染液染1分钟，水洗干净；滴加革兰氏碘液复染1分钟，水洗，沥干；滴加95%乙醇脱色，约20～30秒，不时摇动玻片至无紫色为止，水洗；滴加番红染液复染1～2分钟，水洗，待干。油镜检查。 

阳性－阴性对照控制：取金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌悬液，制成涂片，分别染色操作后作为革兰氏阳性和阴性的对照控制。 
结果判断：菌体呈蓝紫色为革兰氏阳性菌；菌体呈红色为革兰氏阴性菌。

在以下情况必须进行微生物鉴定

新购进标准菌株经传代菌株。

产品检验结果超标或出现异常。 

控制菌检查出现异常时，如有菌生长，不管是否典型菌生长，均需鉴定。

水质检验时，微生物检测结果超过行动限。

环境监测时，微生物检测结果超过行动限。