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ELISA检测样本处理方法

来源:上海源叶生物科技有限公司   2017年08月11日 18:44  
    用于elisa检测的样本有很多种类型,如血清、血浆、尿液、细胞培养上清或组织匀浆液等,下面介绍下不同类型的检测样本前期的处理方法。
1、血清
    血清是zui常用于elisa检测的一类样本,处理也比较简单。用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液标本,将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜,使血清析出。(将试管或离心管倾斜放置,使液面横截面增大,能使血清更大程度的析出。)4℃ 1000×g离心20分钟,仔细收集上清。建议将血清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。同时必须得注意,在采血的过程中应避免溶血,以及避免细菌污染,以免造成实验结果的不准确。
2、血浆
    用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本,标本采集后30min内4℃ 1000×g离心15min,取上清即血浆。将上清分装多份,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。避免使用溶血或高血脂的标本。
3、尿液、唾液等其他液体生物样本
    1000×g离心20min,取上清即可检测。为了保证检测的准确性,保存于-20℃或-80℃的样本在1~6个月内检测;4℃保存的样本应在1周内进行检测。
4、细胞裂解液
    1.吸去培养板内的培养基,用胰酶消化细胞,加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。
    2.收集细胞悬液,1000×g离心10min,弃去培养基,用预冷的pbs润洗3次。
    3.加入适量的预冷pbs或细胞裂解液(临用前加入蛋白酶抑制剂)重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μl pbs重悬。
    4.将样品放入-20℃或-80℃,使样品冷冻,再放室温解冻样品,反复冻融几次,使细胞充分裂解。也可将样品进行超声破碎,以达到裂解的目的。
    5.4℃ 10000×g 离心10min,除去细胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
5、细胞培养上清
    取细胞培养上清到离心管,1000×g离心20min,除去细胞碎片及杂质,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
6、组织匀浆液
    1.将组织样本用pbs (0.01m, ph 7.4) 冲洗,洗去组织表面残留的血液或杂质。
    2.将组织块称重,记录后剪碎,碎块应尽量小,便于匀浆得更充分
    3.将组织按一定的比例加入预冷的pbs(临用前加入蛋白酶抑制剂)匀浆,匀浆比例为组织重量:pbs体积=1:9,匀浆时置于冰上或冰浴中。
    4.吸取匀浆液到离心管,4℃ 5000×g 离心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。

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