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生物分离纯化填料离子交换层析介质胰糜蛋白酶纯化层析介质

来源:西安蓝晓科技新材料股份有限公司   2017年05月23日 15:24  

胰糜蛋白酶的分离纯化

胰蛋白酶在医药、食品、工业和有机合成中具有广泛应用临床上可用于抗炎症和消化药物的复配食品加工中用于酒类和饮料的澄清、畜蛋白原的水解、胰蛋白胨的制备和除去乳品在贮藏时氧化产生的味道工业上用于皮革加工和生丝处理。糜蛋白酶为胰腺分泌的重要蛋白质水解酶能迅速分解蛋白质消化溶解变性蛋白质临床用于多种疾病的治疗并取得良好效果,如颅内感染性炎症、呼吸系统感染及炎症、消化系统的感染及炎症等。因此胰糜蛋白酶的纯化研究具有重要的经济和技术意义。

蓝晓科技(股票代码:300487)生命科学事业部致力于开发、生产生物分子分离纯化用层析介质,拥有琼脂糖、葡聚糖、高分子聚合物三种基架的凝胶过滤、离子交换、疏水、亲和等各种层析介质百余种。目前,工业上对于胰糜蛋白酶的纯化,常用离子交换层析介质和亲和层析介质。本次实验针对蓝晓科技生产的seplifeR离子交换层析介质和seplife R亲和层析介质进行胰糜蛋白酶的纯化工艺探究。

一.亲和层析工艺

Benzamidine seplife 4FF是蓝晓科技研发生产的一款亲和层析介质,专门用于胰糜蛋白酶分离。该层析介质对胰蛋白酶有特异性吸附,吸附载量大于35mg/mL对糜蛋白酶吸附小于3mg/mL且实验条件对胰糜蛋白酶的活性无影响。

1 色谱条件:

色谱柱:26*20 ;装柱高度:10 cm;流速:5 ml/min

    缓冲液ATris-HCl + NaCl;

缓冲液BTris-HCl

样品说明:胰糜蛋白酶含量相当,有少量杂质

2、色谱图

  1. 结果分析

分别对原液、流穿液、洗脱液中蛋白浓度和胰糜蛋白酶的效价进行测定。蛋白浓度通过紫外吸收法,效价测定根据中国药典2015年版胰糜蛋白酶的效价测定方法

项目

糜效u/mg

胰效价u/mg

上样液

1109

990.81

流穿液

1447.46

0

洗脱液

0

2660.38

中国药典2015年版规定糜蛋白酶的效价不小于1000单位/mg;胰蛋白酶效价不得少于2500单位/mg。由此可以看出蓝晓科技开发生产的Benzamidine seplife 4FF亲和层析介质可以用来生产满足药典要求的胰蛋白酶和糜蛋白酶。

二.离子交换层析工艺

CM Seplife FF是蓝晓科技开发生产的弱阳离子交换层析介质,吸附载量可达60mg溶菌酶/mL介质质量稳定,蛋白活性回收率高

1.色谱条件:

色谱柱:26*20 ;装柱高度:10 cm;流速:5 ml/min

    缓冲液AHAc-NaAc

缓冲液BHAc-NaAc + NaCl

样品说明:客户提供的粗提液,含较多杂质,糜蛋白酶含量高,胰蛋白酶含量低

2.色谱图

 

3、结果分析

分别对原液、流穿液、洗脱液123中蛋白浓度和胰糜蛋白酶的效价进行测定。蛋白浓度通过Bradford法测定,效价根据中国药典2015年版胰糜蛋白酶的效价测定方法

项目

糜效u/mg

胰效价u/mg

上样液

1109

990.81

流穿液

1447.46

0

洗脱液

0

2660.38

三.小结

流穿液中全为杂质,洗脱峰一为杂蛋白,洗脱峰二为糜蛋白酶,洗脱峰三为胰蛋白酶。糜蛋白酶效价满足要求的纯化后不少于1200单位/mg由此可见,CM Seplife FF胰糜蛋白酶也能达到良好的分离效果,可用于生产满足药典要求的糜蛋白酶

通过以上实验可以看出,在实际生产过程中,蓝晓科技开发生产的Benzamidine seplife 4FFCM Seplife FF均可用于胰糜蛋白酶的分离纯化,具体选择要根据样品情况而定。另外,不同的缓冲液体系对分离效果也有影响。(除了Benzamidine seplife 4FF、CM Seplife FF,蓝晓科技开发生产的DEAE Seplife FF也可用于胰糜蛋白酶的分离纯化,该部分内容将于下期继续介绍。)

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