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电子显微镜检测细胞方法

来源:济南皓淼医疗设备有限公司   2016年10月23日 15:05  

电子显微镜检测细胞方法的信息介绍由济南浩淼医疗设备有限公司为您提供。以下内容会证明电子显微镜是观察细胞形态的方法

一、仪器与试剂

射电子显微镜或扫描电子显微镜,组织切片机,离心机,离心涂片机。

戊二醛固定液:取25%戊二醛原液10ml,加入0.2mol/L PBS液50ml,再加入蒸馏水40ml,混匀,4℃保存。

锇酸固定液:将含有1g锇酸的小瓶浸入清洁液一晚,用双蒸水冲洗数遍后,将小瓶放在盛有50ml双蒸水的100ml棕色磨口瓶内,击破锇酸小瓶使其内锇酸溶于水,1~5ml小瓶分装,避光,4℃保存。用时再稀释1倍成1%的应用液。

二、操作步骤

  离心收集约5×106 细胞,用PBS洗涤两次后,弃上清,加1ml 2.5%戊二醛悬浮细胞,移入1.5ml Ep管中,室温下4 000r/min离心15min,固定细胞0.5~1h;

在磷酸缓冲液里漂洗1~2h或更长时间,尽量将戊二醛冼净,用1%的锇酸固定液固定30min~1h;

固定完毕后加入50%乙醇脱水10min→70%乙醇10min→90%乙醇10min→90%丙酮10min→100%丙酮三次各10min;

丙酮与环氧树脂1:1包埋2h,再放入纯包埋剂(环氧树脂包埋全浸透)数小时;

环氧树脂包埋,62℃烤箱二天,进行超薄切片,用醋酸铅铀双染法进行切片染色;

在透射电子显微镜下观察细胞形态、细胞质及细胞核的变化,照相并记录实验结果;

三、结果判断

电子显微镜是观察细胞形态的方法,细胞核和细胞器的结构清晰易辨。凋亡细胞染色质固缩并凝结成块,聚集在核膜周边呈新月状或环状小体,细胞浆浓缩,内质网变疏松并与胞膜融合,形成一个个空泡,线粒体结构无明显改变。细胞凋亡的晚期,细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。坏死细胞的染色质稀疏呈细颗粒状,分布无规律,边界不清,细胞浆肿胀,细胞器结构破坏,细胞膜不完整。

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