细胞名称：大鼠原代膝关节滑膜成纤维细胞ATCC

细胞代次：P4

细胞规格：T25瓶（包邮）/2冷冻管（需加干冰运输费）

细胞冻存：无血清冻存液

细胞传代：第一次建议1:2

1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：

取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜*培养液继续培养或进行传代。

2、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入*培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀细胞用12ml*培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，zui后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）待细胞*贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。

3、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入*培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。

4、细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞移至含5ml*培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀用5ml*培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）第二天，换用新鲜*培养基继续培养。

原代细胞与细胞系有什么区别？细胞培养物来源于原代外植体或分散的细胞悬液。通常在这样的培养物中细胞增殖形成汇合地单层细胞或密集地细胞悬液。根据传统定义，*次收获和接种的细胞被称为原代细胞[Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 这类细胞生命周期有限，在有限的生命周期内需掌握好细胞zui大的生长空间，以保持细胞群中基因型和表型的*性。细胞系是不断生长，分化的细胞群，因其经过遗传改造，致使其具有无限增长的潜能。体外生长的细胞系用于医疗或科研。实际上，连续细胞系可以用大量次培养基培养，随着代数的增加细胞的基因型和表型都有可能发生改变。需要指出的是，在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群除非细胞经过了遗传改造。

1、倍增和代数有什么区别？倍增是培养物中细胞总数加倍，通常是指细胞指数或对数生长期。代数是指细胞群从培养瓶中移出，传代培养过程的次数，传代培养的目的是使细胞处于低密度以刺激其进一步生长。

2、接收到的冻存细胞该如何处理？收到包装箱后，立即将冻存细胞从干冰移入液氮中冻存。此过程尽量快以避免升温。不要将细胞储存在-80℃，这样会对细胞造成不可挽回的伤害。

3、有多少经验才能开始正常人类细胞培养？推荐有经验者在无菌环境下用层流净化罩工作，如果有经验的话对其它细胞类型也是很有利的。如果你是细胞培养的初学者或打算建立细胞培养实验室，我们会为你提供帮助。请的细胞培养专家。

售后服务告知书

1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？

1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；

2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；

3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；

4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；

5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；

6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。

二）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？

1. 客户造成细胞污染，不重发；

2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；

3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；

4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；

5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；

6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；

7. 视具体情况而定。

YS4846C人成纤维细胞GM00526

YS4847C人B淋巴细胞GM50152

YS4848C卵巢癌细胞caov-4

YS4849C褐家鼠脑海马体成纤维细胞H19-7/IGF-IR

YS4850C小鼠主动脉血管平滑肌细胞MOVAS

YS4851C小鼠视网膜神经节细胞RGC-5

YS4852C小细胞肺癌细胞DMS53

YS4853C肺间皮瘤细胞NCI-H2052

YS4854C人直肠腺癌细胞SW1463

YS4855C人表皮样癌细胞A-431-LUC2

YS4856CIL­10报告293细胞IL-10ReporterHEK293Cells

YS4857C人肺腺癌肿瘤相关成纤维细胞HUMAN LUNG ADENOCARCINOMA CAFS

YS4858CNFAT-Luc 报告基因 T 淋巴细胞Jurkat-Lucia NFAT Cells

YS4859C牙骨质IDG-CM6

YS4860C人B细胞淋巴瘤ri-1

YS4861C卵巢腺癌细胞EFO-27

YS4862C人多发性骨髓瘤细胞KMS-12-PE

YS4863C胰腺腺癌细胞T3M-4

YS4864C人胰腺导管癌细胞MIA PaCa-2

YS4865C成人急性髓系白血病细胞SKM-1

YS4866C小鼠淋巴母细胞b淋巴细胞TC1

YS4867C小鼠髓样乳腺癌贴壁细胞EO771

YS4868C小鼠淋巴瘤细胞L5178YTK

YS4869C小鼠胚胎成纤维细胞3T3-swissalbino

YS4870C小鼠肥大细胞瘤细胞P815

YS4871C人黑色素瘤细胞A375.S2

YS4872C肺支气管癌ChaGo-K-1

YS4873CRAW-Dual CellsRAW-Dual

YS4874C人前列腺癌细胞MDA-PCA-2B

YS4875C人T淋巴细胞白血病细胞C8166（C8166-CD4）

YS4876C人胚胎肾细胞293T

YS4877C小细胞肺癌细胞NCI-H889

YS4878C大鼠肺泡Ⅱ型细胞RLE-6TN

YS4879C人纵状神经纤维瘤细胞hTERT ipNF95.6

YS4880C人食道癌肿瘤细胞Colo680N

YS4881C口腔舌鳞状细胞癌细胞CAL-33

YS4882C小鼠肺腺癌细胞系LA795

YS4883C脑星形细胞瘤SW1783

YS4884C小鼠T淋巴细胞CTLL-2

YS4885C人甲状腺癌细胞ACT-1

YS4886C人肝癌细胞JHH4

YS4887C唐氏综合症背景羊水来源细胞GM03606

YS4888C膀胱癌细胞Ku1919

YS4889C肺癌大细胞瘤HCC1438

YS4890C人卵巢癌细胞OVCAR-8

YS4891C恶性黑色素瘤细胞Malme3M

YS4892C小鼠骨髓瘤杂交瘤细胞BB7.1

YS4893C小鼠骨髓瘤杂交瘤细胞ME 1

YS4894C小鼠骨髓瘤杂交瘤细胞BBM.1

YS4895C小鼠骨髓瘤杂交瘤细胞L243

YS4896C小鼠骨髓瘤杂交瘤细胞4E11

YS4897C小鼠骨髓瘤杂交瘤细胞BB7.7

YS4898C小鼠骨髓瘤杂交瘤细胞IGG-6A6

YS4899C小鼠骨髓瘤杂交瘤细胞9.3F10

YS4900C小鼠神经干细胞NE-GFP-4C

YS4901C人成纤维细胞GM00325

YS4902C羊水衍生细胞GM02422

YS4903C小鼠胚胎瘤细胞ATDC5

YS4904C人肝细胞THLE-3

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