中检维康iELisa呕吐毒素检测ELISA试剂盒

概要

呕吐毒素也称为脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON），是由串珠镰刀菌、轮状镰刀菌以及多育镰刀菌等产生的真菌毒素，大多存在于粮谷、饲料及其制品中。中毒后影响消化系统和神经系统，主要表现为呕吐、头痛、头晕、腹痛、腹泻等症状。我国标准规定：玉米、大麦、小麦及其制品中呕吐毒素不得超过1mg/kg，猪、犊牛、泌乳期动物配合饲料中呕吐毒素不得超过1mg/kg，牛、家禽配合饲料中呕吐毒素不得超过5mg/kg。

原理

测定的基础是抗原-抗体反应。微孔板上包被有抗抗体。加入呕吐毒素（DON）标准品或样品、酶标抗原和抗体后，游离的呕吐毒素与酶标抗原竞争结合抗体，抗体或抗体结合物与固定在微孔板上的抗抗体再结合，没有结合的标准品、酶标抗原及抗体被洗去，加入TMB底物显蓝色，加入终止液后颜色由蓝变黄，用酶标仪在450nm处检测，吸光值与样品中呕吐毒素含量成负相关，与标准曲线比较即可得出呕吐毒素的含量。

1. 试剂盒的组成

1. 包被有抗抗体的96微孔板：1块（96 孔，12 条×8 孔）

2. DON标准品：0ng/mL 、10ng/mL、40ng/mL、100ng/mL、250ng/mL 1 瓶 × 1.0mL

3. DON抗体：              1 瓶 × 10mL

4. DON酶标抗原：           1 瓶 × 10mL

5. 10× 浓缩洗涤液：         1 瓶 × 50mL

6. DON稀释缓冲液A：        1 瓶 × 50mL

7. DON稀释缓冲液B：        1 瓶 × 50mL

8. 显色底物TMB：           1 瓶 × 17mL

9. 终止液：                 1 瓶 × 7mL

10. 试剂盒说明书：           1份

11. 质检报告：               1份

1. 需要的仪器、试剂

1. 仪器

1. 酶标仪 450nm（iELisa全自动酶标仪或相当者）

2. 微量移液器：20μL-200μL单道，100μL-1000μL单道, 50μL-300μL八道

3. 多功能旋转混合器（或者摇床、高速均质器）

4. 酶标板振荡器

5. 涡旋混合器

6. 离心机

7. 50mL离心管

8. 1.5mL离心管

9. 定性滤纸

10. 过滤漏斗

11. 天平：感量0.01g

1. 试剂

1. 纯水（蒸馏水、去离子水）

适用样品：谷物（玉米、小麦、大麦、大米、大豆），饲料（高灵敏度），饲料，发酵液，尿液样品。

注意事项

1. 室温低于20℃或试剂及样品未回到室温（20- 25℃）会导致数值偏低。

2. 在洗板过程中如果出现板孔干燥过久的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。

3. 标准物质和显色液对光敏感，避免直接暴露在光线下。

4. 混合要均匀，洗板要*（包括加样品和标准液的时候都必需充分混合均匀）。

5. 终止液为强酸性物质，避免接触皮肤。

6. 不要使用过了有效期的试剂盒，也不要混合使用不同批次的试剂盒，这样会引起测定结果不准确。

7. 试剂盒的储存条件是2-8℃，切勿冷冻。

中检维康iELisa呕吐毒素检测ELISA试剂盒

性能指标

1. 检测限LOD: 谷物0.15ppm（mg/kg），饲料0.25ppm（mg/kg），发酵液0.15ppm（mg/kg）,尿液0.05ppm（mg/kg）。（LOD：空白样品测定值+2倍标准偏差SD）

2. 定量限LOQ: 谷物0.25ppm（mg/kg），饲料0.5ppm（mg/kg），发酵液0.25ppm（mg/kg）,尿液0.1ppm（mg/kg）。

3. 定量检测范围：谷物0.25-6.0ppm，饲料0.5-12.0ppm，发酵液0.25-6.0ppm,尿液0.1-1.0ppm。