中检维康IAC-SEP®杂色曲霉毒素免疫亲和柱

                                 （产品编号：IAC106）                                                     

使用对象

中检维康IAC-SEP®杂色曲霉毒素免疫亲和柱能够特异性的纯化与浓缩样品中的杂色曲霉毒素。杂色曲霉毒素免疫亲和柱广泛地应用于粮食、食品、饲料、坚果、花生、酱油、醋、辣椒、胡椒、药材和酒类等样品的提取，该方法速度快、操作简单、准确性高，对准确灵敏的测定样品中的杂色曲霉毒素起到十分重要的作用。

原理

样品经甲醇+水提取液提取、过滤、稀释，然后通过键合有杂色曲霉毒素特殊抗体的免疫亲和柱。此时，杂色曲霉毒素被亲和柱中的抗体特异性的吸附，用水或缓冲液将免疫亲和柱上的杂质除去，然后用甲醇使抗体变性，从而将杂色曲霉毒素从亲和柱上洗脱下来。后，用HPLC或荧光计进行定量检测。

储存条件

该亲和柱保存在2-8 °C条件下，不能冷冻，保质期为18个月。建议在室温（18-30°C）下使用。

实验溶液制备

HPLC流动相，甲醇/水（75+25）：取750mL甲醇加250mL水，混合均匀，用0.22微米的尼龙筛过滤。

pH 7.0 PBS溶液：称取8.0g氯化钠，1.44g磷酸氢二钠，0.24g磷酸二氢钾，0.2gKCL，用990mL纯水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0，后用纯水稀释至1000mL。

液相色谱条件

色谱柱：Cloversil-C18 4.6*150mm（5um）或4.6*250mm（5um）

流动相：甲醇-水（75+25，v/v）

流速：0.8mL/min

检测器：紫外检测器，波长325 nm

进样体积：20~100uL

分析步骤

1. 样品提取及稀释：

准确称取试样40.0g于250mL具塞锥形瓶中，加入5.0g氯化钠及准确加入100.0mL乙腈，以均质器高速搅拌提取2min。槽纹滤纸过滤，准确移取20.0mL滤液，50℃氮气吹干仪下氮吹，当浓缩到0.5mL左右时，停止氮吹，用pH 7.0 PBS溶液定容至20mL，用玻璃纤维滤纸过滤，取滤液10 mL，备用。

1. 样品的净化  

    将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10.0mL样品提取液注入玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约2mL/min（1滴/秒）流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体。以2-3mL/min（1-2滴/秒）流速用10.0mL水淋洗柱子2次，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体。准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速为1 mL/min ~2mL/min（1滴/秒），收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。

注意事项

1. 样品添加回收试验时，标准品添加到样品中，静置2小时后或过夜，再进行样品前处理，否则会出现回收率偏低的现象。
2. 不要随便更改操作说明书中的操作步骤，如需更改要和本公司技术部联系，确认更改是否合理。
3. 操作步骤中，样品过柱，淋洗，洗脱时，一定要控制好流速，不能太快，否则会使检测结果偏低。
4. 如果将标准品直接过柱验证回收率时，一定要确保标准上柱液中甲醇浓度不要超过5%，否则会影响柱子的吸附能力。
5. 试验中使用的玻璃仪器等，一定要清洗干净，尤其是用次氯酸等处理过的仪器，否则会使检测结果偏低。

需要准备的设备及试剂（中检维康提供）