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赛默飞离子色谱分离脉冲积分安培检测器测定 果糖二磷酸钠及其有关物质

阅读:422      发布时间:2018-5-31
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果糖二磷酸钠注射液是一种治疗低磷酸血症的药物,临床上常用作心肌 缺血辅助治疗药。低磷酸血症可在急性情况,如输血、体外循环下进行手术 和胃肠外营养时出现,也与一些慢性疾病,如慢性酒精中毒、长期营养不 良、慢性呼吸衰竭中碳酸耗竭有关[1]。果糖二磷酸钠注射液在临床中的应用很 广泛,但由于其本身的结构特点,果糖二磷酸钠的测定多采用衍生后紫外分 光光度法;同时在果糖二磷酸钠的生产过程中可能会引入杂质,其有关物质 有磷酸果糖、磷酸葡萄糖和果糖等,这几种杂质都是强极性化合物,而且含 量很低,在普通反相色谱和示差检测器中无法检测。有文献报道采用纸电泳 法分离苯二胺显色后检测的方法,以及薄层色谱法*检测[2-4],也有文献采 用固体复合酶法测定果糖二磷酸钠的含量[5]。这几种方法不仅操作繁琐,且重 复性和灵敏度存在问题。

本实验采用离子色谱脉冲安培法分离测定果糖二磷酸钠和3种有关物质, 分离度好,灵敏度高,操作简便。建立了一种有效检测果糖二磷酸钠及其有 关物质的方法。

测试条件 仪器:ICS-5000色谱仪(Thermofisher公司),配四 元梯度泵,ED安培检测器,AS-AP自动进样器 色谱柱: CarboPac PA 20 保护柱 6 . 0 µ m , 50×3 mm,( P/N: 060144) CarboPac PA 20 分离柱 6 . 0 µ m , 150×3 mm,( P/N: 060142) 柱温:30 ℃; 淋洗液:NaOH/ NaOAc梯度淋洗 流速:0.4 mL/min; 定量环:20 µL; 检测方式:脉冲积分安培检测(四电位波形)

样品前处理 样品稀释适当倍数后,经过0.22 µm尼龙滤膜过滤, 取续滤液直接上机分析。

实际样品分析 市售果糖二磷酸钠注射液,稀释后经过0.22 µm滤膜 过滤,按选定的色谱条件进行测定,外标法定量,其谱 图见图2,分析结果见表2。

结果和讨论 色谱柱的选择及淋洗液梯度条件优化 果糖二磷酸钠的结构中含有两个磷酸基团,可以采用 阴离子交换色谱法对其进行分离。同时其有关物质为 磷酸果糖、磷酸葡萄糖和果糖,这些结构中均含有羟基, 能够在安培检测器上有信号。为了保证色谱峰的分离度和 保留时间的合理性,我们选择CarboPac PA 20的糖柱和 NaOH/NaOAc梯度淋洗的方式。 在上述色谱条件下几种 物质的色谱图如下图(图1)

详细了解,请点击赛默飞离子色谱

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