详细介绍
通用原则:
1,熊源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒先选择好探针,然后设计引物使其尽可能的靠近于探针。
2, 扩增子的长度应不超过400bp,理想的能在100-150bp内,扩增片断约短,有效的扩增反应就越容易获得。较短的扩增片断也容易保证分析的一致性
3, 保持GC含量在20%和80%之间,GC富含区容易产生非特异反应,从而会导致扩增效率的降低,及在SG分析中非特异信号。
4, 为了保证效率和重复性,应避免重复的核苷酸序列,尤其是G(不能有4个连续的G)
5, 将引物和探针互相进行配对检测,以避免二聚体和发卡结构的形成。
b),探针设计指导
1,在设计引物之前设计探针
2,探针的Tm值应在68-70℃之间,如果是目测探针,则要仔细审查GC富含区。
3,探针的5’端要避免有鸟氨酸,5’G会有淬灭作用,即使被切割下来这种淬灭作用也还会存在
4,选择C多于G的链作探针,G的含量多于C会降低反应效率,这时就应选择配对的另一条链作为探针。
6, 探针应尽可能的短,不要超过30个bp。
7, 检测探针的DNA折叠和二级结构。
产品名称 | 熊源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 |
英文名称 | 详见说明书 |
编号 | BJP3133 |
产品特点:
全新的热启动DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,可在PCR反应的过程中抑制非特异扩增,从而最大限度地减少非特异性扩增产物的产生,提高荧光定量PCR反应的特异性;
采用新型的荧光染料EvaGreen,与传统荧光染料相比,对PCR反应抑制更小,而且荧光信号更强,检测灵敏度更高;
含有UNG的试剂盒可以防止PCR产物污染体系,进而有效防止实验过程中PCR产物的交叉污染;
TaqMan荧光定量PCR试剂盒提供了除引物、探针、模板外的所有实验所需组分,并配备2×Buffer,可完成不同类型荧光探针的实时荧光定量PCR反应,方便用户使用;
试剂盒的通用性强,可适用于Roche的Light Cycler、ABI各型实时荧光定量PCR仪和。
服务流程:
1.客户认真写好订单,提供待检基因相关信息;
2.签订技术服务合同,支付预付款(30-50%);
3.设计合成定量PCR引物(或客户提供文献引物委托本公司合成);
4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反转录;
5.PCR预实验,主要检测引物的特异性和扩增效率;
6.正式定量实验:对所有样品上机检测;
7.实验结果和数据分析,形成报告。
原理:
所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
检测方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加*同步。
SYBR定量PCR扩增荧光曲线图
PCR产物熔解曲线图
2.TaqMan探针法:
探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成*同步。
以下是公司*产品:
醋酸阿奈可他标准品CTAB 溴代十六烷基三胺 十六烷基三基溴化铵 Amresco
醋酸阿奈可他相关物质A标准品CTAB 溴代十六烷基三胺 十六烷基三基溴化铵 Amresco
茴香脑标准品十六烷基三基溴化铵 AR
1,6-脱水吡喃葡萄糖标准品Hexadecanoic acid 棕榈酸
阿尼利定标准品Etoxazole 螨唑
茴香醚标准品Urea 尿素(AR 99.7%) *
磷酸安他唑啉标准品Urea 尿素(AR 99.7%) *
地蒽酚标准品Urea 尿素(AR 99.7%) *
安替比林标准品Urea 尿素(AR 99.7%) *
芹菜素标准品Urea 尿素(AR 99.7%) Sigma *精神分裂症易感基因抗体Glycitin;黄豆黄苷
蓬乱蛋白1抗体Ethyl ferulate;阿魏酸酯
兔抗人鸟苷三磷酸酶-发动蛋白2抗体Capsaicin;辣椒碱
转录因子E2F-1抗体Glycitein;黄豆黄素
转录因子E2F-2抗体Timosaponin A3;知母皂苷A3
人瘤病毒16型E7抗体Memantine HCl;盐酸美金刚
胶质细胞谷氨酸运载蛋白1 抗体Stachydrine hydrochlori;盐酸水苏碱
EB病毒编码核蛋白-3抗体Chitotriose 3HCl;壳三糖
内皮素转化酶1ECE1抗体Chitohexaose 6HCl;壳六糖
食道癌相关基因抗体Irisflorentin;次野鸢尾黄素