详细介绍
一、细胞基本属性
产品名称 | 产品规格 | 商品货号 |
猪鼻腔粘膜上皮细胞永生化 | 1×106 | A01X1210 |
细胞详述
鼻腔粘膜,剪成鼻粘膜,覆盖于鼻腔表面,粘膜下方为软骨、骨或骨骼肌。
该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。
注意事项: 收到细胞后第一次传代建议1:2传代,充液培养基是维持培养基,不能用来培养细胞。
细胞特性
1) 组织来源于实验动物的正常鼻腔粘膜组织。
2) 细胞鉴定:广谱角蛋白(PCK)或细胞角蛋白-19(CK-19)免疫荧光染色为阳性。经鉴定细胞纯度高于90%。
3) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
4) 细胞生长方式:铺路石状细胞,不规则细胞,贴壁培养。
二、细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余消化液,37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml培养基终止消化;
3)用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的培养基至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4)待细胞贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的培养基。
3. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液,1000rpm,离心5min,保留沉淀;
2)添加0.25%消化液0.5mL至离心管中,重悬沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min);消化完向离心管内加入5ml培养基终止消化;
3)经1000rpm,离心5min,丢弃上清,用5ml培养基重悬沉淀,接种于新的培养瓶内;
4)待细胞贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的培养基(37℃预热)。
5)原瓶内贴壁细胞按正常消化处理。
4. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
四、注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中,消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和技术部沟通;由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详尽告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
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