详细介绍
参数规格:
产品货号:FS-02R6431
产品规格:48T 0.1PCR管
产品分类:PCR-荧光探针法
产品运输:低温运输
实验过程:
一、试剂准备 1. DNA模板 2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 二、操作步骤 1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。 3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。 |
注意事项
1.公司产品仅用于科研整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作,各区实验服、仪器、耗材应独立使用,不能混用;实验用吸头采用带滤芯吸头;样本处理区应配有生物安全柜,样本处理在生物安全柜中进行操作;三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2.为避免RNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3.每次实验应该设置阴、阳性对照。
4.试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心。
5.试剂盒内所配阴性和阳性对照在第一次使用前应全部转移至标本准备区,并单独存放。
6.为防止荧光干扰,应避免裸手直接接触PCR反应管,并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7.仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置;不同批号试剂不能混用。
8.ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正,淬灭基因选择None。
9.实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。
Phospho-Met (Tyr1349) /FITC 荧光标记磷化肝细胞生长因子受体(原癌基因)抗体IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Tn-C/FITC 荧光标记腱糖蛋白-C抗体IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Acetyl-Histone H1b(K53) 乙酰化组蛋白H1b抗体 0.2ml
Rabbit Biotin/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488标记的兔抗生物抗体IgG 0.1ml
GPR17 G蛋白偶联受体17抗体 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Biotin whole serum 兔抗生物抗血清 1ml
Tn-C/FITC 荧光标记腱糖蛋白-C抗体IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
AFA/snoRNP/U3RNP(Human fibrillarin antibody) ELISA Kit 人抗核仁纤维蛋白抗体Multi-class antibodies: 48T
IMP3/IGF-IIBP3 胰岛样生长因子2 mRNA 结合蛋白3抗体Multi-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh MAGEG1/HCA4/NDNL2 黑色瘤相关抗原G1抗体(肝癌相关蛋白4) 0.2ml
HIS(Human Histamine) ELISA KIT 人组胺 96T
RENT1+hUPF1 ATP依赖解旋RENT1抗体 0.2ml
CD2AP 白细胞分化抗原CD2AP抗体 0.1ml
IMP3/IGF-IIBP3 胰岛样生长因子2 mRNA 结合蛋白3抗体Multi-class antibodies: 0.2ml
Rabbit Guinea pig IgG/FITC FITC标记的兔抗豚鼠IgG 0.3ml
GIP 胃泌抑制肽抗体 0.1ml
Rhesus antibody Rh Agpat2 溶血磷脂酰基转移β抗体 0.2ml
Phospho-p90RSK (Ser380) /FITC 荧光标记磷化丝/苏激p90RSK蛋白抗体IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Goat IgG/Cy5.5 Cy5.5标记的兔抗羊IgG 0.1ml
SSB/La /FITC 荧光标记抗干燥症SSB/La抗体IgGMulti-class antibodies: 0.2ml
榛果源性核酸检测试剂盒48T0.1PCR管猪蛋白质二硫键异构(PDI)elisa检测试剂盒
猪骨粘连蛋白(ON)elisa检测试剂盒
猪去甲肾上腺(NA/NE)elisa检测试剂盒
猪蛋白抑制剂γ(PKIγ)elisa检测试剂盒
猪红因子(ESF)elisa检测试剂盒
猪唾液(SA)elisa检测试剂盒
猪天门冬氨基转移(AST)elisa检测试剂盒
猪三叶因子1(TFF1)elisa检测试剂盒
猴趋化样因子超家族成员5(CKLFSF5)elisa检测试剂盒
猴血小板膜糖蛋白IV (GP4/CD36)elisa检测试剂盒
猪半胱天冬3(CASP3)elisa检测试剂盒
猪高尔基蛋白73(GP-73)elisa检测试剂盒
猪信号传导转录活因子1(STAT1)elisa检测试剂盒
猪钙腔蛋白(CALU)elisa检测试剂盒
猪胱天蛋白10(CASP10)elisa检测试剂盒
操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。