人支气管平滑肌细胞永生化

人支气管平滑肌细胞永生化公司正在出售的产品：人胎盘绒毛癌细胞JAR(STR鉴定正确)人乳腺癌细胞BT-20(STR鉴定正确)人恶性胚胎横纹肌瘤细胞RD(STR鉴定正确)小鼠肺上皮细胞TC-1（种属鉴定）绵羊肺成纤维细胞OAR-L1（种属鉴定）人卵巢癌细胞SW626(STR鉴定正确)SV40转染人成骨细胞hFOB1.19(STR鉴定正确)

细胞详述

平滑肌即无纹肌的通称，平滑肌是由长纺锤形的单核细胞构成。它不构成独立的器官，而只是成为构成体壁和内脏壁的因素（肌层）。平滑肌细胞互相连接，形成管状结构或中空器官；在功能上可以通过缩短和产生张力使器官发生运动和变形，也可产生连续收缩或紧张性收缩，使器官对抗所加负荷而保持原有的形状。

支气管平滑肌细胞的收缩、舒张、增殖和凋亡与临床许多疾病的病理生理过程有关，如支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等。例如在哮喘发病时，可以检测到气管平滑肌发生数目的增生和肥大，表型也发生改变，由收缩型转为合成型与分泌型，并分泌多种与细胞因子；而且出现向气管腔迁移的迹象。

该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。

注意事项：  收到细胞后第一次传代建议1：2传代，充液培养基是维持培养基，不能用来培养细胞。

细胞特性

1)  细胞来源于人正常支气管组织。

2) 细胞鉴定：平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫荧光染色为阳性。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5） 细胞生长方式：长梭状细胞，贴壁培养。

一、细胞基本属性

二、细胞培养状态

发货时发送细胞电子版照片

三、使用方法

客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。

2. 贴壁细胞消化

1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml培养基终止消化；

3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

4)待细胞贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的培养基。

3. 细胞收货脱落

1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml培养基终止消化；

3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml培养基重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；

4)待细胞贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的培养基(37℃预热)。

5)原瓶内贴壁细胞按正常消化处理。

4. 细胞实验

因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。

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四、注意事项

1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。

2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。

3. 传代培养过程中，消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。

4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和技术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。