详细介绍
兔乳腺成纤维细胞
培养基:含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
传代特性:可传5代左右;3代以内状态佳
消化液:0.25%胰dan白酶
培养条件:气相:空气,95%;CO2,5%
传代比例:1:2
细胞简介:兔乳腺成纤维细胞分离自乳腺组织;乳腺位于皮下浅筋膜的浅层与深层之间,浅筋膜伸向乳腺组织内形成条索状的小叶间隔,一端连于胸肌筋膜,另一端连于皮肤,将乳腺腺体固定在胸部的皮下组织之中。乳腺是哺乳动物少数可以重复经历生长、功能分化和退化过程的器官之一。纤维结缔组织伸入乳腺组织之间,形成许多间隔,这些纤维结缔组织对乳房起固定作用,而纤维结缔组织是由成纤维细胞构成的。成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分,由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大,轮廓清楚,多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构,其细胞核呈规则的卵圆形,核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛,细胞质嗜弱碱性,具明显的蛋白质合成和分泌活动,在一定条件下,它可以实现跟纤维细胞的互相转化;成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的乳腺成纤维细胞呈圆形、折光性良好,悬浮于培养基中。30min细胞贴壁,其中部分开始伸出伪足,表现为小的突起;6h后细胞基本贴壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布较均匀,散在生长,不聚集成团;细胞生长迅速,5-7天即呈融合状态,细胞排列紧密,有的交叉重叠生长,平坦、胞体较大,细胞质透明,细胞核较大,呈椭圆形,颜色淡。细胞融合,并彼此连接成网状;细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。
一、细胞基本属性
细胞名称 | 兔乳腺成纤维细胞 | 商品货号 | A01X2124 |
组织来源 | 乳腺组织 | 种属来源 | 兔 |
产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 | 生长特性 | 贴壁 |
换液频率 | 每2-3天换液一次 | 细胞形态 | 成纤维细胞样 |
原代细胞分离培养的思路:
取材--分离--培养--鉴定
首先将组织从机体中取出,经胰dan白酶/胶原酶处理后分散成单细胞,再在合适的培养基中培养,使细胞繁殖到一定系数后进行细胞鉴定。
实验步骤:
一、取7-10d雄性SD大鼠,颈椎脱臼处死,浸泡于75%乙醇消毒3-5min。
二、在超净工作台中,将大鼠断头置于玻璃培养皿中,打开颅腔后取出全脑,放在盛有预冷的PBS玻璃培养皿中,去除小脑和间脑。
三、将大脑半球在干滤纸上缓慢滚动以去除软脑膜和脑膜大血管,再放在新的盛有预冷的PBS玻璃培养皿中。
四、用细解剖镊去除大脑白质、残余大血管和软脑膜,保留大脑皮质。
五、大脑皮质放于DMEM中,剪碎成约1mm3大小,放入50ml的离心管中,加入混合酶液I(0.05-0 .1%II型胶原酶,0 .025-0 .05%IV型胶原酶,200-400U DNaseI),混匀后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室温1 000×g离心8min,去上清液。
七、沉淀中加入20%BSA重悬浮,充分混匀,1 000×g,20min,4℃离心,去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1%的胶原酶/分散酶,0.05-0.1%I型胶原酶,100-300U DNaseI )重悬浮,混匀,37℃水浴消化0.5-1h,700×g室温离心6min,去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培养液悬浮混匀,铺于经离心形成连续梯度的12ml 50%Percoll(25 000×g,60min,4℃),1000×g,4℃离心10min。
十、靠近底部的红细胞层之上的白黄色的层面即为纯化的微血管段,吸出后DMEM漂洗两次(离心1000×rpm,6min,室温),去上清液。
加入DMEM培养液(20%FBS,4ug/ml素 )重悬浮,接种于含5%的大鼠 血清37℃孵育过夜所制备的细胞培养皿中,置于37℃、5%CO2培养箱内静置培养24h后更换不含素的混合培养基,随后隔天换液。
公司正在出售的产品:
大鼠真皮微血管内皮细胞 | 大鼠胃平滑肌细胞 |
肌红蛋白抗体 | PE-Cy3标记的乙醇脱氢1抗体 |
大鼠主动脉弓内皮细胞 | PE-Cy3标记的TBC结构域家族D4蛋白抗体 |
大鼠心脏微血管内皮细胞 | PE-Cy3标记的突触足蛋白抗体 |
大鼠颈动脉成纤维细胞 | PE-Cy3标记的细胞质膜微囊蛋白-1抗体 |
大鼠颈静脉内皮细胞 | PE-Cy3标记的范可尼综合征相关锌指蛋白抗体 |
大鼠主动脉瓣膜间质细胞 | PE-Cy3标记的干扰诱导蛋白激PACT抗体 |
大鼠大隐静脉内皮细胞 | PE-Cy3标记的Rab11家族相互作用蛋白2抗体 |
大鼠肾动脉平滑肌细胞 | PE-Cy3标记的蛋白激C α抗体 |
大鼠肾动脉内皮细胞 | PE-Cy3标记的NADPH氧化调节蛋白1抗体 |
小鼠胸主动脉平滑肌细胞 | PE-Cy3标记的凋亡抑制因子1抗体 |
大鼠食管上皮细胞 | 兔乳腺成纤维细胞PE-Cy3标记的驱动蛋白家族KIF17抗体 |
大鼠食管平滑肌细胞 | PE-Cy3标记的促进凋亡基因抗体 |
大鼠食管成纤维细胞 | PE-Cy3标记的AHA3抗体(拟南芥) |
大鼠肝窦内皮细胞 | PE-Cy3标记的剪接调控蛋白129抗体 |
注意事项:
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中,yi酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和技术部沟通;由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详尽告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。