详细介绍
兔肾上腺皮质细胞
培养基:原代间质细胞培养体系
传代特性:根据细胞特性
消化液:0.25%胰dan白酶
培养条件:气相:空气,95%;CO2,5%
细胞简介:肾上腺皮质由3层构成,其功能异常可以引起肾上腺皮质概念亢进、肾上腺皮质概念减退、肾上腺皮质增生等。原发性肾上腺皮质功能减退,可因自身免疫、出血等造成肾上腺皮质损伤,出现肾上腺皮质功能减退。因此,体外培养肾上腺皮质细胞为研究肾上腺皮质功能减退等疾病提供了基础和前提。
一、细胞基本属性
细胞名称 | 兔肾上腺皮质细胞 | 商品货号 | A01X2107 |
组织来源 | 正常肾上腺组织 | 种属来源 | 兔 |
产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 | 生长特性 | 贴壁 |
换液频率 | 每2-3天换液一次 | 细胞形态 | 圆形或多角形,不规则细胞 |
原代细胞分离培养的思路:
取材--分离--培养--鉴定
首先将组织从机体中取出,经胰dan白酶/胶原酶处理后分散成单细胞,再在合适的培养基中培养,使细胞繁殖到一定系数后进行细胞鉴定。
实验步骤:
一、取7-10d雄性SD大鼠,颈椎脱臼处死,浸泡于75%乙醇消毒3-5min。
二、在超净工作台中,将大鼠断头置于玻璃培养皿中,打开颅腔后取出全脑,放在盛有预冷的PBS玻璃培养皿中,去除小脑和间脑。
三、将大脑半球在干滤纸上缓慢滚动以去除软脑膜和脑膜大血管,再放在新的盛有预冷的PBS玻璃培养皿中。
四、用细解剖镊去除大脑白质、残余大血管和软脑膜,保留大脑皮质。
五、大脑皮质放于DMEM中,剪碎成约1mm3大小,放入50ml的离心管中,加入混合酶液I(0.05-0 .1%II型胶原酶,0 .025-0 .05%IV型胶原酶,200-400U DNaseI),混匀后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室温1 000×g离心8min,去上清液。
七、沉淀中加入20%BSA重悬浮,充分混匀,1 000×g,20min,4℃离心,去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1%的胶原酶/分散酶,0.05-0.1%I型胶原酶,100-300U DNaseI )重悬浮,混匀,37℃水浴消化0.5-1h,700×g室温离心6min,去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培养液悬浮混匀,铺于经离心形成连续梯度的12ml 50%Percoll(25 000×g,60min,4℃),1000×g,4℃离心10min。
十、靠近底部的红细胞层之上的白黄色的层面即为纯化的微血管段,吸出后DMEM漂洗两次(离心1000×rpm,6min,室温),去上清液。
加入DMEM培养液(20%FBS,4ug/ml素 )重悬浮,接种于含5%的大鼠 血清37℃孵育过夜所制备的细胞培养皿中,置于37℃、5%CO2培养箱内静置培养24h后更换不含素的混合培养基,随后隔天换液。
公司正在出售的产品:
大鼠脂肪细胞 | 大鼠角质形成细胞 |
单克隆抗体 | PE-Cy3标记的DNA复制抑制因子抗体 |
大鼠子宫微血管内皮细胞 | PE-Cy3标记的细胞衰老抑制基因抗体 |
大鼠乳腺导管上皮细胞 | PE-Cy3标记的FAM135A蛋白抗体 |
大鼠阴道真皮成纤维细胞 | PE-Cy3标记的9号染色体开放阅读框98抗体 |
大鼠骨细胞 | PE-Cy3标记的锚蛋白重复结构域蛋白26抗体 |
大鼠成骨细胞 | PE-Cy3标记的小鼠抗人CD22单克隆抗体 |
大鼠软骨细胞 | PE-Cy3标记的EFHD1蛋白单克隆抗体 |
大鼠滑膜成纤维细胞 | PE-Cy3标记的胞质接头蛋白Keap1 |
大鼠骨骼肌细胞 | PE-Cy3标记的钙结合蛋白5/3抗体 |
大鼠骨骼肌成纤维细胞 | PE-Cy3标记的磷化周期E2抗体 |
大鼠纤维环细胞 | 兔肾上腺皮质细胞PE-Cy3标记的基质金属蛋白-15抗体 |
大鼠髓核细胞 | PE-Cy3标记的FAM161A蛋白抗体 |
大鼠破骨细胞 | PE-Cy3标记的磷化β-连环蛋白/β-连环/β链接抗体 |
大鼠皮下微血管内皮细胞 | PE-Cy3标记的脱氢/还原家族成员2抗体 |
注意事项:
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中,yi酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和技术部沟通;由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详尽告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。