详细介绍
产品仅用于科研注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 转基因品系玉米DBT418 PCR试剂盒 |
英文名称 | Dbt418 PCR kit for transgenic maize |
货号 | YSP96889 |
自备物品:
15毫升锥形离心管:用于制备样品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶标板:用于比色的容器
分光光度仪:用于比色分析
酶标仪:用于微量样品比色分析
储存条件:
14℃或-20℃
准备物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀释液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
产品说明书 1份
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
产品仅用于科研不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
Cripto1(NT) 畸胎瘤衍生长因子(N端) 现货供应 0.2ml 6Chloroimidazo[1,2b]pyridazine
CCDC85B 卷曲螺旋结构域蛋白85B 现货供应 0.2ml Adenine phosphate
PTOV1 前列腺肿瘤高表达蛋白1 现货供应 0.2ml Hypoxanthine
Cripto1 畸胎瘤衍生长因子(C端) 现货供应 0.1ml Guanine
Cripto 1 monoclonal (CT) 畸胎瘤衍生长因子单克隆(C端) 现货供应 0.1ml Guanine
Cripto 1 monoclonal 畸胎瘤衍生长因子单克隆 现货供应 0.2ml Watersoluble tetrazoliuM 8;GLT008
CSFV Polyprotein 猪瘟病毒 现货供应 0.1ml GLT005
SMN1 运动神经元生存蛋白1 现货供应 0.1ml GLT004
Interleukin 36β英文简称IL36β7号染色体开放阅读框72 检测范围:2110nmol/L320pg/ml
MSA3IgG antibody英文简称MSA3IgG卷曲螺旋结构域蛋白42 检测范围:2111nmol/L200ng/mL
Gli英文简称Gli卷曲螺旋结构域蛋白43 检测范围:2112nmol/L2000pg/mL
Epidermal growth factor Like Domain Protein, Multiple 7英文简称EGFL7卷曲螺旋结构域蛋白46 检测范围:2113nmol/L30μg/ml
amyloid beta英文简称Aβ卷曲螺旋结构域蛋白63 检测范围:2114nmol/L480ng/mL
Voltagedependent calcium channel subunit alpha2 delta1英文简称CACNA2D1卷曲螺旋结构域蛋白54 检测范围:2115nmol/L20ng/mL
Parathyroid Hormone Receptor 1英文简称PTHR1卷曲螺旋结构域蛋白61 检测范围:2116nmol/L20ng/mL
papillomavirus 16 L2 protein英文简称HPV16 L2 protein卷曲螺旋结构域蛋白8 检测范围:2117nmol/L
Interferon γ antibody英文简称IFNγAb细胞周期蛋白依赖性激酶CABLES1 检测范围:2118nmol/L80ng/mL
Ceramide Kinase英文简称CERK细胞分裂周期相关蛋白3 检测范围:2119nmol/L80ng/mL
hexosaminidase英文简称Hex细胞分裂周期2样蛋白激酶5 检测范围:2120nmol/L24ng/mL
Coenzyme A英文简称CoA神经酰激酶CERK 检测范围:2121nmol/L100U/L
Cluster of Differentiation 39英文简称CD39细胞分裂周期样激酶2 检测范围:2122nmol/L200ng/mL
S100 Calcium Binding Protein B英文简称S100β细胞分裂周期样激酶3 检测范围:2123nmol/L8ng/mL
phosphorylated TAR DNA binding protein 43英文简称pTDP43维甲调节核基质相关蛋白 检测范围:2124nmol/L20ng/mL
转基因品系玉米DBT418 PCR试剂盒高尔基体自身蛋白GM130抗体 英文缩写:GPR21
糖代谢相关蛋白1抗体 英文缩写:GPR22
G蛋白偶联受体64抗体 英文缩写:GPR24
γ氨基丁酸受体相关蛋白样1抗体 英文缩写:GPR25
法尼基二磷酸合酶1抗体 英文缩写:GPR26
鸟嘌呤核苷酸结合蛋白1抗体 英文缩写:GPR27
胶质纤维酸性蛋白GFAPδ抗体 英文缩写:GPR3
β半乳糖苷酶抗体 英文缩写:GPR30
巨轴索神经病蛋白GAN抗体 英文缩写:GPR30
G蛋白偶联受体结合蛋白O亚基A2抗体 英文缩写:GPR30(G Protein Coupled Receptor 30)
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATG随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。