详细介绍
注意事项
1、使用产品时应注意无菌操作,避免污染。
2、本产品含有血清和双抗,如无特别需要不用额外再添加血清和双抗,可以直接使用。
3、为保持本产品的最佳使用效果,不宜将其长时间放置于室温或较高的温度环境中。
4、所有产品请于保质期内使用,超出保质期,必须放弃使用。
5、本产品只供进一步科研使用,不可应用于临床等其他方面。
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产品名称:SUP-B15(Ph+急淋白血病细胞系)
规格:5×106cells
货号:YS-02X9952
产品分类:细胞系
储存条件2℃-8℃,避光储存
运输条件冰袋冷藏运输
实验材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml灭菌烧杯2个; 人皮肤成纤维细胞,CCC-HSF-1细胞
3、50ml离心筒2个
4、灭菌培养皿1个,细胞培养瓶1个
5、1ml ,200μl移液器各1支;枪头盒2个;无菌玻璃搅拌棒1个
6、细胞计数板1块;
7、灭好菌的镊子1把,剪刀1把;
8、酒精灯1台;
细胞复苏步骤:
1:水浴锅预热至37℃备用
2:准备15mL离心管,并向其中加入适量培养基待用
3:将细胞冻存管从-80℃冰箱或液氮中取出,放入PE手套中,迅速投入水浴锅
4:用力摇晃冻存管,使其在1分钟内融化
5:用纸巾擦拭水渍,转移至生物安全柜。用移液枪吸取细胞悬液,缓慢滴加到步骤2中准备好的离心管
6:1200rpm离心3分钟
7:弃上清,用新鲜培养基重悬细胞,接种至新的无菌培养器皿中
细胞培养方法:
1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏:
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
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