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产品简介
| 供货周期 | 现货 | 应用领域 | 化工,生物产业 |
|---|---|---|---|
| 主要用途 | 仅供科研实验 | 英文名称 | Recombinant Caspase 10 (CASP10) |
| 种属 | Homo sapiens (Human，人) | 规格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
| 品牌 | 研生 |
详细介绍
公司产品仅供科研使用，不得用于临床！
产品名称 | 英文名称 | 物种 |
胱天蛋白酶10(CASP10)重组蛋白 | Recombinant Caspase 10 (CASP10) | Homo sapiens (Human，人) |
商品介绍：
ALPS2; FLICE2; MCH4; Apoptosis-Related Cysteine Peptidase; Cysteinyl Aspartate Specific Proteinases 10; FAS-associated death domain interleukin-1B-converting enzyme 2 信号转导 酶与激酶 细胞凋亡 物种：Homo sapiens (Human，人) 来源：原核表达 宿主E.coli 内毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法测定) 亚细胞定位：：n/a 预测分子量：30.6kDa 实际分子量：-(差异分析请参阅说明书) 片段与标签：Phe223~Gln459 (Accession # Q92851) with 缓冲液成份：磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） 性状：冻干粉 纯度：> 95% 等电点：6.8 应用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 规格10μg50μg200μg1mg5mg |
蛋白表达及纯化：
1.培养500ml哺乳动物细胞，然后将重组质粒转染到细胞中，通过瞬时表达产生目标蛋白。
2.收集含有目标蛋白的部分（细胞或培养上清）。
3.通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
4.通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
5.通过Western-blot验证目标蛋白正确性。
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注意事项：
1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同，应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
2、虽然作用温和，但能硬化组织，固定时间过久会导致组织变脆，切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露，可造成假阴性的染色，影响免疫组化结果。因此，4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时，有时需要对抗原先进行修复，然后才能进行免疫染色等后续操作。
4、本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
操作步骤：
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂， 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。
2． 每100mg固体组织置于培养皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小块，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃匀浆器上下手动匀浆15次，注意低温操作；
3． 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管，离心10000转/分，4℃离心5 min；
4． 取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
5． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1． 贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液；
2． 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中， 1000转/分离心10 min，再用10mL/150mm培养板的冷PBS，1000转/分离心5 min洗两次；
3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂， 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。
4． 细胞洗涤后，转至新的预冷的离心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：
细胞数量 | Lysis Buffer加入量 |
107个 | 0.5 mL～1 mL |
5×106个 | 0.2 mL～0.5 mL |
5．置于4℃摇床平台上，温和振荡15 min；
6． 14,000rpm，4℃离心15min，取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
7． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
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