酸性神经鞘磷脂酶(ASM)真核蛋白

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公司产品仅供科研实验产品属性：

产品名称：酸性神经鞘磷脂酶(ASM)真核蛋白   

物种：Mus musculus (Mouse，小鼠)

英文名称：Eukaryotic Acid Sphingomyelinase (ASM)

SMPD1; NPD; SMase; aSMase; Sphingomyelin Phosphodiesterase 1,Acid Lysosomal; Simply Sphingomyelinase

酶与激酶

代谢通路

神经科学

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标签选择：

亲和标签：蛋白重组表达过程中采用亲和标签融合表达有两方面的作用：一方面是为了使蛋白纯化过程变得更加容易；另一方面是为了促进某些不溶性蛋白可溶。蛋白标签可分两类：一类是短肽类标签；一类是长肽以融合蛋白（fused partner）形式共表达。使用不同的蛋白标签需要根据具体案例来分析。

不同的系统步骤稍微有些不同的，大致步骤如下：

真核表达系统的重组蛋白表达步骤：

a.      选择表达载体和宿主细胞（常用的CHO和HEK293）

b.      表达载体的构建

c.      无内毒素的质粒抽提

d.      细胞瞬时转染

e.      表达小试，条件优化

f.       表达分析和鉴定（SDS-PGAE和WB）

g.      大量表达

h.      亲和纯化

i.        检测和鉴定

原核表达系统的重组蛋白表达步骤：

a.      选择表达载体

b.      密码子优化

c.      基因合成/亚克隆

d.      转化表达菌株

e.      蛋白表达小试分析

f.       如果蛋白可溶，蛋白亲和纯化

g.      如果蛋白不可溶，则需要变复性来制备可溶蛋白。

h.      鉴定，包括SDS-PAGE和WB鉴定

GZMH蛋白；表达蛋白的分析、纯化、检测

　　诱导表达成功后，表达蛋白的分析、纯化、检测应该顺当，按一般的实验步骤做没太大的问题。

操作步骤 ：

根据使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。

1、样品前处理：

a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。

c)对于组织样品： 把切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

2、后处理：

将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作

特点：

标记：标记反应简单、温和且很少抑制抗体活性，将与抗体共价结合是一种非常简便、直接的标记方法。

酶标记：酶标记抗体是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成，其应用范围非常广泛，结果即时可见、敏感性高。

荧光标记：荧光基团AbFluorTM是新型的荧光标记物之一，产品覆盖350-770nm。不同的AbFluor基团经恰当的激光可发光， 从而得知抗体的定位和待测抗原的分布情况，主要用于细胞分选或高分辨率免疫染色，是一种非常好的亚细胞水平定位的方法。

AADACL2产品名称: 芳香乙酰胺脱乙酰基mei样蛋白2抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Cow, Rabbit, Sheep

Hemogen产品名称: 红细胞分化相关基因蛋白抗体交叉反应: Human

Pectinesterase inhibitor 18产品名称: 果胶mei蛋白18抗体交叉反应: Arabidopsis Thaliana

CTDSPL产品名称: 联会复合体蛋白3抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Rabbit

SLC30A9产品名称: 溶质载体家族蛋白30成员A9抗体交叉反应: Human, Rat

Inhibin Alpha产品名称: suA/Inhibin α抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep, Monkey

heavy chain cardiac Myosin产品名称: 心肌肌球蛋白重链抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

KAT13D/CLOCK产品名称: 生物钟KAT13D蛋白抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Sheep

RRAGA + RRAGB产品名称: RAS相关GTP结合蛋白A抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Horse, Sheep

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