牙龈卟啉单胞菌培养

资源名称:牙龈卟啉单胞菌培养

种属: Porphyromonas gingivalis
分离基物     人类龈沟
提供形式     冻干管，斜面培养物
安全等级     1
模式菌株     yes
应用领域     模式菌株，质量控制菌株
培养方法     
培养基     TSA+5%脱纤维羊血：胰蛋白胨(酪蛋白胰酶消化物) 15.0g，大豆蛋白胨(大豆粉木瓜蛋白酶消化物) 5.0g，氯化钠 5.0g，琼脂 15.0g，5%脱纤维羊血，pH7.3±0.2。121℃，15min。
传代方法     ①冻干管：75%酒精擦拭管壁，后用砂轮在冻干管壁划两圈，掰断，用200μL无菌水或培养基充分溶解，平板涂布，活化培养。 ②斜面：试管口用75%酒精擦拭后，火焰灼烧，后用无菌接种铲切块，挑取接入平板或斜面，培养。
生长条件     37℃，厌氧。
存储条件     2-8℃冷藏

牙龈卟啉单胞菌培养注意事项：
1.  取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。
2.  冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜（DMSO）对细胞不是*无毒副作用，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作 较大，因此，必须在1-2min内使冻存液*融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜（DMSO）选择进口产品。
3.  离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。
4.  离心问题：目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除 DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大， 死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜（DMSO），DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液 体前倒净，且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无有异常。
5.  细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时1ml细胞液要加10ml－15m培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。
6.  复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。
7.  加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题是DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响 细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是1％。所以如果你的冻存液的浓度是 10％DMSO的话那么加10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。

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检测方法： 
1．将病人标本和/或液状对照品放至室温（15-30℃），轻轻混匀。测试前从包装袋中取出检测卡平放。
2．将1根Binax样本拭子浸入要测试的标本中，*浸没拭子头。如果拭子有滴水，将拭子靠在收集容器的边上，排去多余的液体。
3．检测卡内部的右手边有两个孔，将拭子插入底部的孔中（拭子孔），稳步向前推，使整个拭子头在上部的孔中可见，不要取出拭子。
4．垂直持放A试剂瓶，高出检测卡上方1/2到1英寸，慢慢向底部的孔中加入3滴A试剂。
5．立即从检测卡的右缘揭去粘附衬，封闭检测卡，过15分钟在窗口判读结果。15分钟后读取的结果可能不准确。然而，有些阳性病人不到15分钟就出现可见样品线。COLO 201(人结直肠腺细胞)5×106cells/瓶×2
小鼠淋巴瘤细胞英文名称：EL4.IL-2
A2780(人卵巢细胞)5×106cells/瓶×2
腺腺/阿霉素耐药株英文名称：MCF-7/Adr
Andrade氏糖类肉汤/安德雷德氏糖类肉汤/Andrade,s Carbohydrate Broth细菌的糖发酵试验250克国产/进口
人腺细胞英文名称：MX-1
SCHAEDLER琼脂/SCHAEDLER厌氧菌琼脂/SCHAEDLER Agar厌氧菌的分离培养250克国产/进口
TMB(可溶型）粉末1g国产
胰蛋白酶-EDTA(含100mL酶解缓冲液)10mL
麦芽汁琼脂/麦芽汁培养基/Malt Extract Agar用于啤酒酵母等真菌分离传代250克国产/进口
人前列腺细胞英文名称：DU 145
TSN琼脂/胰蛋白胨亚硫酸盐新霉素琼脂/胰酪胨亚硫酸盐新霉素琼脂/胰酶亚硫酸盐新霉素琼脂/TSN Agar用于梭菌的检测250克国产/进口1-N-Cbz-3--英文名称：1-N-Cbz-3-aminopiperidineCAS号：711002-74-3分子式：234.29分子量：C13H18N2O2
1-溴-2-氟-4-三氟甲氧英文名称：1-bromine-2-three-4-CAS号：168971-68-4分子式：259分子量：C7H3BrF4O
2-氟-5-碘吡英文名称：2-f-5-CAS号：171197-80-1分子式：222.99分子量：C5H3FIN
二甲英文名称：TwoaminotolueneCAS号：2687-25-4分子式：122.17分子量：C7H10N2
2-溴-5-吡英文名称：2-bromo-5-cyanopyridinesCAS号：139585-70-9分子式：183.01分子量：C6H3BrN2
磺酰英文名称：BenzenesulfonylhydrazineCAS号：80-17-1分子式：172.2分子量：C6H8N2O2S
血卟啉英文名称：BloodporphyrinCAS号：14459-29-1分子式：598.69分子量：C34H38N4O6
9,9'-(1,3-)二-9H-咔唑英文名称：9,9'-(1,3-phenyl)two-9H-carbazoleCAS号：550378-78-4分子式：408.49分子量：C30H20N2
2-吡嗪羧酸铜(II)英文名称：2吡嗪羧酸铜（II）CAS号：304656-23-3分子式：309.727分子量：C10H6CuN4O4
2--5-(4-甲氧)-1,3,4-噻二唑英文名称：2--1,3,4-(4-)-5-twoCAS号：1014-25-1分子式：207.25分子量：C9H9N3OS
3-氯丙分子式：分子量：英文名称：3-chlorideCAS号：
N-(三正膦亚)-1H-并三唑-1-甲胺英文名称：N-(threephenylphosphinesubunitis-1H-andthree-1-)benzenewithmethylamineCAS号：124316-00-3分子式：408.43分子量：C25H21N4P
盐石蒜碱分子式：323.77142分子量：C16H18ClNO4英文名称：RedspiderlilyalkalihydrochloricacidCAS号：2188-68-3
氟氨吡英文名称：FluorinepyridineCAS号：2840-00-8分子式：198.99分子量：C5H2Cl2F2N2
人肺腺细胞（胸膜渗出液）英文名称：Calu-3
缓冲蛋白胨水/缓冲蛋白胨水增菌液/BPW沙门氏菌前增菌培养和李氏菌前增菌培养250克国产/进口