详细介绍
非洲绿猴肾细胞系/HCV-NS4A;Vero-HCV-NS4A说明书【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 非洲绿猴肾细胞系/HCV-NS4A;Vero-HCV-NS4A说明书
形态特性 上皮样细胞
生长特性 贴壁生长
特征特性 Vero-HCV-NS4A细胞整合有丙型肝炎病毒的NS4A基因,能稳定表达NS4A蛋白,是HCV基础研究的*摸型。它由武汉大学病毒学国家重点实验室郭佳博士于2008年构建并保存。
培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
传代方法 1:3传代,2-3天传一代
传代情况 C24
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶 同工酶鉴定
染色体
使用权限 A类
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%。
2、培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二、细胞处理:
1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养)。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1)弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。 细胞到达客户手中,1个月内出现任何问题,导致细胞在冻存前死亡,我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤:
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
SK-NEP-1(人肾母细胞瘤细胞)5×106cells/瓶×2
沟肠杆菌 Enterobacter cloacae
紫褐小单孢菌 Micromonospora violaceofusca
鸡胚成纤维细胞英文名称:DCE
人间充质干细胞-脐带 Human
异常毕赤酵母 Pichia anomala
豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna
HFT-8810(人胎儿胸腺细胞株)5×106cells/瓶×2
瑞氏青霉 Penicillium raistrickii
刺孢吸水链霉菌 Streptomyces hygrospinosus
大鼠肾上腺嗜鉻细胞瘤细胞(未分化)英文名称:PC-12(未分化)
柠檬形克勒克酵母 Kloeckera apiculata
酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
MSTO-211H(人肺细胞)5×106cells/瓶×2
泡盛曲霉 Aspergillus awamori
淡紫拟青霉 Paecilomyces lilacinus
Hep B1.2(人肝细胞)5×106cells/瓶×2
酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
球孢白僵菌 Beauveria bassiana
大鼠软骨细胞*培养基100mL
酸球菌亚种 Lactococcus lactis subsp.lactis
绿色木霉
小鼠畸胎瘤细胞英文名称:P19250mL 二甲基二氯硅烷
500U MboI
250g 干粉型 SB 培养基
Cycloheximide 23-0200-50 50mg
凝胶法内毒素半定量试剂盒 130504-10 10x0.1mL
1000U SalI
50 支 DNA 样品采样拭子
0.1mL×10 BL21(DE3) 化学感受态细胞
50 次 磷酸化蛋白纯化试剂盒
红 CAS114-07-8 1g
ConA 糖蛋白分离试剂盒 131067-10 10 次
1个 杂交管 (35×300mm)
100mg 链脲佐素
5μg 10nt 随机引物,0.5μg/μL
20μL Ac-LEHD-FMK(Caspase9Inhibitor)
25μL Fluorescein-12-dUTP 溶液,1mM
总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒 18-0720-100 100 次
SSC 溶液 ,20× 100405-100 100mL
100U Tfl DNA 聚合酶
100mL 非冻型血液 RNA 保存液