长尾绿猴肾细胞；4647说明书

长尾绿猴肾细胞；4647说明书【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

细胞名称 长尾绿猴肾细胞；4647说明书
形态特性  上皮细胞样为主
生长特性 贴壁生长
特征特性   
培养条件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  优质胎牛血清，10%
传代方法  消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
传代情况 PN5
冻存条件  *培养基+8%DMSO
支原体检测 阴性
STR 
同工酶 
染色体 
使用权限 A类

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:    
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。   细胞到达客户手中，1个月内出现任何问题，导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤：
1）贴壁细胞传代：提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内，吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
2）悬浮细胞传代：将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min，弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。

人前脂肪细胞*培养基    100mL            
TE-11(人食管细胞)    5×106cells/瓶×2            
TBX培养基/TBX Agar/Tryptone Bile X-glucuronide Agar    检测大肠菌群，大肠菌群培养24小时，显兰色    国产/进口    1升    
人肝动脉内细胞*培养基    100mL            
哥伦比亚血琼脂基础/Columbia Blood Agar Base    各种细菌的基础培养基    国产/进口    250克    
貂肺上细胞    英文名称：        Mv 1 lu    
脑心浸液/无琼脂脑心浸液/脑心浸液肉汤/BHI    用于金黄色葡萄球菌的培养    国产/进口    250克    
大鼠肝动脉平滑肌细胞*培养基    100mL            
西蒙氏柠檬酸盐培养基/西蒙氏枸橼酸盐琼脂/Simmons Citrate Agar    用于肠道菌的柠檬盐利用试验    国产/进口    250克    
Stripping Buffer/蛋白印迹膜再生液    500ml        100ml、500ml    
QG-56(人肺扁平上细胞)    5×106cells/瓶×2            
PBS    规格：    gersion    500ml    
NCI-H460(人肺细胞)    5×106cells/瓶×2            
mEPC, 小鼠内祖细胞-骨髓        gersion        
MLTC-1(小鼠睾间质细胞瘤细胞)    5×106cells/瓶×2            
HL-60, 人早幼粒白血病细胞                
Anglne(人卵巢细胞)    5×106cells/瓶×2   5次    随机引物法 DNA 探针标记试剂盒    
1个    带柄尼龙筛    
20L    半干法电转液 ( 干粉 )    
30μL    α-Tubulin 小鼠单抗    
核酸内切酶 VIII    130642-1000    1000U
MnCl2溶液，25mM，PCR     130307-5    5mL
20 次    天净沙 Ribo-SPIA cDNA 扩增试剂盒    
1500U    EcoRV    
200mL    体内毒素清除剂    
1mL    胚胎裂解液    
ELISA 试剂盒    33    48/96T
动物种属鉴定 PCR Mix 4    131128D-100    100 次
25μg    Xa 因子蛋白酶    
10mL    钙蛋白酶抑制剂Ⅱ溶液，10mg/mL    
10g    2-(N- 啡啉 ) 乙磺酸    
10 次    Southern 血液 DNAout    
氯化胆碱    CAS67-48-1    100g
AG1 种    12-284    1mL
100 次    溴化乙锭清除剂    
25mg    核糖核酸酶 A，牛胰    
100mg    透明质酸酶    
1套    GST 固定试剂盒    
姬姆色素染料    CAS51811-82-6    1g
LB 平板培养基 无抗    130848A-10    10 块
30 次    一站式长效期 SDS-PAGE 电泳套装 (>30KD)