大额牛与婆罗门牛杂交F1代皮肤成纤维样细胞；BOS-6说明书

大额牛与婆罗门牛杂交F1代皮肤成纤维样细胞；BOS-6说明书【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

细胞名称 大额牛与婆罗门牛杂交F1代皮肤成纤维样细胞；BOS-6说明书
形态特性  成纤维细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性  该细胞系来源于一雌性大额牛与婆罗门牛杂交F1代的耳部皮肤组织，2010年由中科院昆明细胞库建立。 
培养条件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
传代方法  1：2传代；3-4天一次
传代情况 P2
冻存条件  基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 荧光法（-）
STR  -
同工酶 
染色体 
使用权限 B类

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:    
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。   细胞到达客户手中，1个月内出现任何问题，导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤：
1）贴壁细胞传代：提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内，吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
2）悬浮细胞传代：将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min，弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。

大鼠角膜内细胞*培养基    100mL            
小鼠骨肉瘤    英文名称：        LM-8    
人膀胱细胞    英文名称：        5637    
人胰腺氟尿嘧啶耐药    英文名称：        PATU-8988/FU    
ER培养基/Eriksson Medium    BR    国产/进口    10升    
人破骨细胞*培养基    100mL            
WORT琼脂/WORT Agar    用于真菌,特别是酵母菌的计数和增菌培养    国产/进口    250克    
人肺紫杉醇耐药株    英文名称：        A549/ Taxol    
碱性L-G培养基基础/Alkaline L-G medium Base    酸性物质处理的结核杆菌标本    国产/进口    250克    
大鼠真成纤维细胞*培养基    100mL            
葡萄糖铵发酵管    BR    国产/进口    20支    
大鼠肠静脉内细胞*培养基    100mL            
选择性巧克力平板/Selectivity chocolate Plate        国产/进口    10块    
SKOV3 [SK-OV-3], 人卵巢腺细胞系                
NCI-H2170(人肺鳞细胞)    5×106cells/瓶×2            
Nuclei蛋白抽提试剂盒（带酶抑制剂）    50次    gersion    国产    
EA.hy926(人脐静脉细胞融合细胞)    5×106cells/瓶×2 多聚半乳糖醛    CAS9049-37-0    1g
蛋白磷酸酶抑制剂混合液 2    130525-1    1mL
250 次    柱式动物 RNAout    
50g    酪蛋白    
20Ku    脲酶 ( 尿素酶 巨豆 )    
50 mL    亲和层析柱    
三氯    CAS76-03-9    100g
pNPP 干粉    131116-1    1g
30μL    β-Actin 小鼠单抗    
500mL    MEM 培养基 ( 含 1% 双抗 +10% 小牛血清 )    
5g    1- 萘胺    
20 T    乙酰胆碱转移酶测试盒    
50 次    玻璃珠法柱式真 DNAout    
Karnovsky 固定液    131226-250    250 mL
一站式磁珠法植物 mRNAout    130973-50    50 次
2mL    镍柱介质    
20μL    Ac-DEVD-FMK(Caspase3Inhibitor)    
1mg    Indo-1 AM    
30 次    单孢子全基因组扩增试剂盒    
JC-10    22-0420-5    5mg