新生牛眼晶体上皮细胞；NBLE说明书

新生牛眼晶体上皮细胞；NBLE说明书【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

细胞名称 新生牛眼晶体上皮细胞；NBLE说明书
形态特性  多角
生长特性 贴壁生长
特征特性  北京眼科研究所建系细胞。 
培养条件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  20～30%FBS
传代方法  1:2传代；3~4天1次。
传代情况 P4
冻存条件  基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法（-）
STR  -
同工酶 
染色体  
使用权限 A类

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:    
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。   细胞到达客户手中，1个月内出现任何问题，导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤：
1）贴壁细胞传代：提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内，吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
2）悬浮细胞传代：将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min，弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。

Hep G2(人肝细胞)    5×106cells/瓶×2            
Candida Elective 琼脂/BiGGY琼脂/坎迪达尼克森选择性琼脂/铋甘氨酸葡萄糖酵母琼脂/BiGGY Agar    食品中Candida及酵母菌总数测定    国产/进口    250克    
Tissue Protein Extraction Reagent/组织蛋白抽提试剂    25次、100次        国产    
一步法Western封闭液    100ml        100ml    
Jurkat, Clone E6-1 (人急性T淋巴细胞白血病细胞)    5×106cells/瓶×2            
WB-F344(大鼠肝上样干细胞)    5×106cells/瓶×2            
GoldCassette-GST/GST重组标签蛋白快速检测试剂盒(精装)    2次、10次        2次、10次    
小鼠胰岛细胞*培养基    100mL            
BPH-1, 人前列腺增生细胞                
小鼠肺细胞    英文名称：        LLC    
Cell Counting Kit-8 (CCK-8试剂盒)    规格：        3000次    
人小梁网细胞*培养基    100mL            
LB Lennox琼脂/LB Lennox Agar    BR    国产/进口    250克    
人脑微血管内细胞    英文名称：        HBMEC    
丙二酸钠培养基/丙二酸盐培养基/Malonate Broth    用于测定肠道细菌对丙二酸盐的利用试验    国产/进口    10克    
人成巨核细胞白血病细胞    英文名称：        MEG-01    
菌种保存培养基/Strain Store Medium    常用细菌斜面传代    国产/进口    250克    100mL    三氟    
1000 支    200 μL RNase-free 黄吸头 ( 袋装 )    
10 管    穿刺培养基    
Etoposide( *泊苷 / 鬼臼乙叉苷 )    23-0240-100    100μL
柱式腐殖酸清除剂    60801-100    100 次
20L    SDS-PAGE 电泳液 ( 干粉 )    
100 次    dNTP 和引物清除剂    
20 次    包涵体微量纯化试剂盒    
50 次    植物叶绿体蛋白提取试剂盒    
固蓝 BB 盐    CAS5486-84-0    5g
包涵体大量纯化试剂盒    90510-2    2次
20L    长效期 SDS-PAGE 电泳液 ( 干粉 )(>30KD)    
50 次    两管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)    
1个    15mL DNA 离心超滤管 (90-150 KD)    
2mg    BAY11-7082(NF-κB 抑制剂 )    
1g    硫酸葡聚糖    
总抗氧化能力检测试剂盒 (ABTS 快速法 )    18-0760-100    100 次
酵母 tRNA 溶液 A( 粗提 )    70904A-1.5    1.5mL
200U    Therminator DNA 聚合酶    
250mL    非冻型组织 RNA 保存液    
25g    叠氮    
100 次    植物种属鉴定 PCR Mix 5    
丽春红 S    CAS6226-79-5    10g
BCIP/NBT 显色试剂盒    81224-100    100mL
非酶 DNA 清除剂 -2    70801-15    15 次