猪睾丸细胞；ST说明书

猪睾丸细胞；ST说明书【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

细胞名称 猪睾丸细胞；ST说明书
形态特性  成纤维细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性  该细胞为二倍体，对猪细小病毒、肠道病毒敏感。 
培养条件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
传代方法  1:3-1:8，每周换液2次
传代情况 P120
冻存条件  基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法（-）
STR 
同工酶 
染色体 
使用权限 A类

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:    
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。   细胞到达客户手中，1个月内出现任何问题，导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤：
1）贴壁细胞传代：提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内，吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
2）悬浮细胞传代：将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min，弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。

UM-UC-3(人膀胱移行细胞)    5×106cells/瓶×2            
胰月示-亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂基础/TSC琼脂/TSC Agar    产气荚膜梭菌的平板计数    国产/进口    250克    
RN-h, 大鼠海马趾神经元                
HS 683(人脑胶质瘤细胞)    5×106cells/瓶×2            
NCI-H23(人非小细胞肺细胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
小鼠海马神经胶质细胞（EGFP标记）                
水杨苷发酵管    BR    国产/进口    20支    
Hacat(人永生化角质形成细胞)    5×106cells/瓶×2            
G-401(人肾Wilms细胞)    5×106cells/瓶×2            
MuM-2C(人眼脉络黑色素瘤细胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
S-180(小鼠肉瘤细胞)    5×106cells/瓶×2            
Inclusion body Denature Reagent/包涵体蛋白溶解液    100ml        国产    
COLO 205(人结肠细胞)    5×106cells/瓶×2            
G-401(人肾Wilms细胞)    5×106cells/瓶×2            
小鼠胎儿表角质形成层细胞*培养基    100mL            
BCA蛋白定量试剂盒    500次        国产    
小鼠成纤维细胞    英文名称：        3T3    
胰酶细胞消化液(含酚红)    规格：        100ml  1mL    植物蛋白酶抑制剂    
绿豆核酸酶    120408-1000    1000U
杂交袋    90206-20    20 个
50L    Tricine-SDS-PAGE 阴极电泳液 ( 干粉 )    
100 次    动物种属鉴定 PCR Mix 4    
50 次    DNA 电泳分子量标准 (3)φX174 DNA/Hae Ⅲ    
100U    DNA 促旋酶 (E.coli)    
D- 甘露醇    CAS69-65-8    250g
十二烷基磺酸    131049-100    100g
50 次    柱式水样 DNAout    
10mg    莽草酸    
100g    矮壮素    
100mL    RNase-free CTAB 溶液 ,20%    
1mL    Y187 酵母种    
ATP 依赖的 DNase    120510-200    200U
环状 DNA 全基因组扩增试剂盒    100947-30    30 次
10mL    微量核酸沉淀剂    
1g    Hemoglobin(NO 清除剂 )    
5g    D(+) 木糖    
250 mL    Zamboni 固定液    
维生素 B1    CAS59-43-8    10g
成骨细胞生长因子    21-0010-5     5mL