猪肾传代细胞；IBRS－2说明书

猪肾传代细胞；IBRS－2说明书【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

细胞名称 猪肾传代细胞；IBRS－2说明书
形态特性  上皮细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性  IBRS-2细胞建系于1964年（Castro M de）。IBRS-2细胞可用于很多猪病毒增殖，包括猪的嵌杯状病毒（Porcinecaliciviruses）、猪细小病毒（Porcine parvovirus）、水泡性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus）、非洲猪瘟病毒（African swine fever virus）、口蹄疫病毒（Foot-and-mouth-disease-virus）等。 
培养条件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
传代方法  1:3传代,2-3天传一代
传代情况 C15
冻存条件  基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR 
同工酶 同工酶鉴定
染色体 
使用权限 A类

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:    
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。   细胞到达客户手中，1个月内出现任何问题，导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤：
1）贴壁细胞传代：提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内，吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
2）悬浮细胞传代：将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min，弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。

角质细胞生长因子 - 不含动物成分    21-0190-5    5mL
RNase-free 氯化锂溶液 ,10M    100907-100    100mL
5次    PCR 法 DNA 探针生物素标记试剂盒     
250mL    氨基染膜液    
1g    GSH( 抗氧化剂 )    
50 次    即用型荧光定量 RT-PCR 试剂盒    
HDAC 抑制剂    23-0310-1    1g
紫外交联仪    120931-1    1台WL营养琼脂/华伦斯坦实验室营养琼脂/WL Nutrient Agar    啤酒和发酵产品中酵母菌和细菌的计数    国产/进口    250克    
人肺成纤维细胞    英文名称：        HFL1    
假单胞分离肉汤/Pseudomonas Isolation Broth    假单胞菌群增菌培养    国产/进口    250克    
大鼠正常肝细胞    英文名称：        BRL-3A    
葡萄球菌增菌肉汤/Staphylococcus Enrichment Broth    凝固酶阳生葡萄球菌选择性增菌    国产/进口    250克    
大鼠肠巨噬细胞*培养基    100mL            
溴甲酚紫葡萄糖肉汤/BCP Glucose Broth    用于罐食品的细菌检验    国产/进口    250克    
SK-OV-3(人卵巢细胞)    5×106cells/瓶×2            
NCI-H2227(人小细胞肺细胞)    5×106cells/瓶×2            
OK(负鼠肾小管细胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
ECV-304(人脐静脉内细胞)    5×106cells/瓶×2            
MCF-7(人腺细胞)    5×106cells/瓶×2            
NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L](小鼠成纤维    5×106cells/瓶×2            
Hep G2, 人肝细胞系                
5637(人膀胱细胞)    5×106cells/瓶×2            
Citrate Buffer(100x)/柠檬酸缓冲液(IHC抗原修复液, 100x)    100ml        国产   小鼠结缔组织纤维细胞    英文名称：        LTK    
5mL    Tricine-SDS-PAGE 上样液    
100 次    粪便 DNAout    
25g    多聚甲醛    
100 次    真细种属鉴定 PCR Mix 2    
QAE 葡聚糖凝胶 A-50    CAS83382-89-2    25g
α-Actin 小鼠单抗    130566-1000    1000μL
RNase-free 水    80403-1    1mL