绵羊肺细胞；OAR-L1说明书

绵羊肺细胞；OAR-L1说明书【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

细胞名称 绵羊肺细胞；OAR-L1说明书
形态特性  成纤维细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性  该细胞系来源于一雌性绵羊的肺组织。1990年由中国科学院昆明细胞库建立。 
培养条件  McCoy's 5A Media (Modified with Tricine)  15%NBS
传代方法  1：2传代；3-4天一次
传代情况 P2
冻存条件  基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 荧光法（-）
STR  -
同工酶 
染色体 
使用权限 A类

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:    
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。   细胞到达客户手中，1个月内出现任何问题，导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤：
1）贴壁细胞传代：提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内，吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
2）悬浮细胞传代：将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min，弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。

Raji(人Burkitt's淋巴瘤细胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
Dami(人巨核细胞白血病细胞)    5×106cells/瓶×2            
MSTO-211H(人肺细胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
RH-35(大鼠肝细胞)    5×106cells/瓶×2            
II型胶原酶(含100mL酶解缓冲液)    10mL            
CHL(仓鼠肺细胞)    5×106cells/瓶×2            
Flag Tag IP/Co-IP Kit/Flag标签免疫沉淀试剂盒    25次        试剂盒    
小鼠食管上细胞*培养基    100mL            
BC-019(人腺细胞)    5×106cells/瓶×2            
小鼠肠上细胞*培养基    100mL            
胰酶细胞消化液    规格：        100ml    
人胎盘绒毛膜细胞*培养基    100mL            
MCPC培养基添加剂/MCPC Medium Supplement    每瓶添加于100ml MCPC培养基中    国产/进口    5毫升    
人卵巢细胞    英文名称：        HO-8910    
大肠杆菌&大肠菌群显色培养基/E.Coli&Coliform Chromogenic Medium    同时检测大肠菌群和大肠杆菌，培养24小时，大肠杆菌显紫色，大肠菌群显红色    国产/进口    1升    
尼氏(Nissl)染色液    规格：        100ml    
赖氨酸脱羧酶培养基/Lysine Decarboxylase Medium    用于细菌赖氨酸脱羧酶试验    国产/进口    5克  琼脂糖凝胶 2B    CAS9050-94-6    100mL
SDS-PAGE 分离胶配胶液    100868-500    500mL
10 次    柱式植物 mtDNAout，测序    
10g    硫酸葡聚糖    
5 mg    羧肽酶 B( 猪胰 )    
50 T    ATP 酶测试盒 ( 组织及细胞膜需高速离心 )    
羧肽酶 B( 猪胰 )    CAS9025-24-5    5 mg
山羊抗小鼠 IgG(H+L), 碱性磷酸酶标记    131144-100    100μL
大提柱式动物 RNAout    80901-5    5次
50 次    木材 DNAout    
10g    4- 甲基伞形酮    
5mL    卵巢上皮细胞生长因子    
1.5mL    β- 乙醇，电泳    
尿道上皮细胞生长因子    21-0240-5     5mL
RNase-free Tris HCl,1M,pH 6.5    60704-100    100mL
2mg    PD 98059(MAPKK 抑制剂 )    
250 mL    Baker 甲醛钙中性固定液    
18mg    Insulin    
100g    RNA  EDTA·2Na ( 乙二胺四二 )    
L-Arginine(NO 前体 )    23-0360-5    5g
柱式尿液 DNAout    90314-50    50 次
100mL    RNA 电泳液 ,10×    
100 μL    COX IV 小鼠单抗    
5mL    dNTP 溶液，2.5mM