兔角膜前基质层成纤维细胞；RCFBF说明书

兔角膜前基质层成纤维细胞；RCFBF说明书【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

细胞名称 兔角膜前基质层成纤维细胞；RCFBF说明书
形态特性  成纤维样
生长特性 贴壁生长
特征特性  北京眼科研究所建系细胞。 
培养条件  F12: Ham's F12 Nutrient Mixture  5%FBS
传代方法  1:3传代；2~3天1次。
传代情况 P8
冻存条件  基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法（-）
STR  -
同工酶 
染色体  
使用权限 A类

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:    
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。   细胞到达客户手中，1个月内出现任何问题，导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤：
1）贴壁细胞传代：提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内，吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
2）悬浮细胞传代：将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min，弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。

 酸性湖蓝V    分子式：    566.66    分子量：     C27H31N2NaO6S2    英文名称：    Alphaurine V    CAS号：    129-17-9    
 甲基蓝    分子式：    799.8    分子量：     C37H27N3Na2O9S3    英文名称：    Methyl blue    CAS号：    28983-56-4-    
 二氯二茂锆    分子式：    292.32    分子量：     C10H10Cl2Zr    英文名称：    Two CL two    CAS号：    1291-32-3    
 1-萘甲基胺    分子式：    157.22    分子量：     C11H11N    英文名称：    1- naphthalene    CAS号：    118-31-0    
 5-硝基-6-氯代甲苯-3-磺酸钠盐    分子式：        分子量：        英文名称：    5- nitro -6- -3- sulfonic acid sodium salt    CAS号：        
 煌橙    分子式：    350.32    分子量：     C16H11N2NaO4S    英文名称：    Brilliant orange    CAS号：    1934-20-9    
 1,5-萘二磺酸钠    分子式：    332.25334    分子量：     C10H6Na2O6S2    英文名称：    1,5- naphthalene two sulfonic acid    CAS号：    1655-29-4    
 4-氟-7-硝并-2-氧杂-1,3-二唑(NBD-F)    分子式：    183.1    分子量：     C6H2FN3O3    英文名称：    4- -7- -1,3- and -2- two (NBD-F)    CAS号：    29270-56-2    
 1,3-二氯-2-丙醇    分子式：    128.98    分子量：     C3H6Cl2O    英文名称：    1,3- two -2-    CAS号：    96-23-1    
 二乙二醇二乙    分子式：    162.23    分子量：     C8H18O3    英文名称：    Diethylene glycol ether two    CAS号：    112-36-7    
 芴    分子式：    166.22    分子量：     C13H10    英文名称：    Fluorene    CAS号：    86-73-7 50 次    柱式凋亡 DNAout    
1mL    HB101 种    
Therminator γ DNA 聚合酶    130617-200    200U
电泳二甲苯蓝 FF 溶液，1%    100934-10    10mL
1000U    T4 RNA 连接酶    
25mg    蛋白酶 K    
100mL    增强型 DAB 显色试剂盒    
100μL    小鼠抗 MBP 标签单抗    
Xa 因子蛋白酶    120507-50    50μg
dTTP 溶液，2.5mM    130913-2    2mL
0.83nmol    通用 miRNA 克隆接头    
50mL    二甲基亚砜 ( 细胞培养 )    
30 次    一步式胞浆蛋白微量制备试剂盒    
20 次    DNA 去磷酸化试剂盒    
琼脂粉    CAS9002-18-0    100g
转 ESPES 基因植物 PCR Mix    131129L-100    100 次
50 次    细胞核蛋白提取试剂盒    
250g    干粉型 SOC 培养基    
1g    二磷酸苷二    
10 次    柱式酱油 DNAout    
L- 胱氨酸    CAS56-89-3    25g