兔间变表皮鳞癌瘤株；VX2说明书

兔间变表皮鳞癌瘤株；VX2说明书【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

细胞名称 兔间变表皮鳞癌瘤株；VX2说明书
形态特性  实体瘤
生长特性 体内生长
特征特性  可在兔皮下、肌肉、肝脏、肺等部位移植，100%成瘤。皮下或肌肉移植100%肺转移。 
培养条件   -
传代方法  制备成细胞悬液接种至大耳白等兔。
传代情况 不详
冻存条件  基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法（-）
STR  -
同工酶 
染色体  -
使用权限 A类

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:    
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。   细胞到达客户手中，1个月内出现任何问题，导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤：
1）贴壁细胞传代：提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内，吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
2）悬浮细胞传代：将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min，弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。

 洛塞琳    分子式：    428.43    分子量：    C20H28O10    英文名称：    Rosarin    CAS号：    84954-93-8    
 毛异黄酮    分子式：    284.26    分子量：    C16H12O5    英文名称：    Gross flavone    CAS号：    20575-57-9    
 黄豆黄苷     分子式：    446.4    分子量：    C22H22O10    英文名称：    Soya bean    CAS号：    40246-10-4    
 对香豆酸    分子式：    164.15802    分子量：    C9H8O3    英文名称：    For sweet bean acid    CAS号：    501-98-4    
 刺五加甙 E     分子式：    742.72    分子量：    C34H46O18    英文名称：    Thorn E    CAS号：    39432-56-9    
 氯唑BH    分子式：    830.71    分子量：     C32H21N6Na3O11S3    英文名称：    Black BH    CAS号：    2429-73-4    
 直接湖蓝5B    分子式：    992.8    分子量：     C34H24N6Na4O16    英文名称：    Direct blue 5B    CAS号：    2429-74-5    
固绿FCF    分子式：    808.91    分子量：        英文名称：    Solid green FCF    CAS号：    2353-45-9    
 罗丹明B    分子式：    479.02    分子量：     C28H31ClN2O3    英文名称：    Rhodamine B    CAS号：    81-88-9    
 甲基二磺酸    分子式：    176.17    分子量：     CH4O6S2    英文名称：    Methyl two sulfonic acid    CAS号：    503-40-2    
 双二异丙基氨基氯化磷    分子式：    266.793    分子量：     C12H28ClN2P    英文名称：    BIS two amino acid    CAS号：    56183-63-2100 次    植物种属鉴定 PCR Mix 7    
25g    L- 天门冬氨酸    
100g    阿拉伯树胶粉    
100 μL    COX IV 小鼠单抗    
硼氢化氰    CAS25895-60-7    5g
一站式 - 尿素 PAGE 电泳套装    130881-30    30 次
1台    紫外交联仪    
5mg    罗丹明 123    
10g    4- 甲基伞形酮    
25 T    超微量 ATP 酶测试盒 ( 可测总 ATPase)    
β- 半乳糖苷酶    CAS9031-11-2    5KU
山羊抗兔 IgG，藻红蛋白标记    131157-0.1    0.1mg
柱式粪便 RNAout    101109-50    50 次
25g    N-2- 羟乙基 -N’-2- 乙基磺酸    
100mg    5- 溴 -2'- 脱氧尿苷    
5mL    肾系膜细胞生长因子    
100mL    Western 印迹膜封膜液 ( 尼龙膜 )    
心肌细胞生长因子    21-0390-5    5mL
RNA  Sarkosyl( 月桂酰 -N- 甲基氨基 )     90709-100    100g
250mg    Poly(I).Poly(C)    
0.1mL×10    BL21(DE3) 化学感受态细胞    
1mg    MG-132(Proteasome 抑制剂 )    
20 次    一站式 GST 标记蛋白质微量纯化套装    
Nicotinamide(Sirt1 抑制剂 )    23-0510-10    10g