狗肺成纤维样细胞；DogL1说明书

狗肺成纤维样细胞；DogL1说明书【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

细胞名称 狗肺成纤维样细胞；DogL1说明书
形态特性  成纤维细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性  该细胞系来源于一雄性家狗的肺组织。1990年由中国科学院昆明细胞库建立。 
培养条件  McCoy's 5A Media (Modified with Tricine)  15%NBS
传代方法  1：2传代；3-4天一次
传代情况 P5
冻存条件  基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 荧光法（-）
STR  -
同工酶 
染色体 
使用权限 A类

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:    
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。   细胞到达客户手中，1个月内出现任何问题，导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤：
1）贴壁细胞传代：提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内，吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
2）悬浮细胞传代：将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min，弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。

 5,5-二甲基海因    分子式：    128.13    分子量：     C5H8N2O2    英文名称：    Two 5,5- methyl hydantoin    CAS号：    77-71-4    
 3-羟基-2,4,6-三溴苯甲酸(TBHBA)    分子式：    374.81    分子量：     C7H3Br3O3    英文名称：    3- hydroxy -2,4,6- three bromo benzoic acid (TBHBA)    CAS号：    14348-40-4    
 异戊基硫醇    分子式：    104.21    分子量：     C5H12S    英文名称：    Isoamyl mercaptan    CAS号：    541-31-1    
 乙二醇丙    分子式：    104.15    分子量：     C5H12O2    英文名称：    Ethylene glycol propylene glycol ether    CAS号：    2807-30-9    
缓冲剂                                    
 精噁唑禾草灵    分子式：    333.72    分子量：     C16H12ClNO5    英文名称：    Fenoxaprop-p-ethyl    CAS号：    113158-40-0    
 乙氧氟草    分子式：    361.7    分子量：     C15H11ClF3NO4    英文名称：    Ethylene oxide.    CAS号：    42874-03-3    
 醋酸可的松    分子式：    402.47    分子量：     C23H30O6    英文名称：    Cortisone acetate    CAS号：    1950/4/4    
 新型杀螨剂    分子式：        分子量：        英文名称：    New type of mite    CAS号：    560121-52-0    
 紫草酸    分子式：    538.46    分子量：    C27H22O12    英文名称：    Purple oxalic acid    CAS号：    28831-65-4    
 盐酸小檗碱    分子式：    371.81422    分子量：    C20H18ClNO4    英文名称：    Berberine hydrochloride    CAS号：    633-65-8支气管上皮细胞生长因子    21-0440-5    5mL
2.0 mL RNase-free 离心管    17-003-500    500 支
1mL    Protein A 磁珠    
1mL    BL21-CodonPlus-RIL 种    
1mg    NS-2028(sGC 抑制剂 )    
10mL    DNA 洗脱液 2.0    
Okadaic acid 盐 (PP1 和 PP2A 抑制剂 )    23-0560-10    10μg
酵母 DNAout    130990-50    50 次
500mg    RNase A 干粉    
100mL    超培养基    
10mL    氯溶液 ,25mg/mL    
1mL    羧苄青溶液 ,50mg/mL    
海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒    130598-100    100 次
TE 缓冲液，PH8.0    80934C-10    10mL
10 次    Southern 细 (G-)DNAout    
0.5mL    dITP 溶液，100mM    
1 mL    即用型 PCR 试剂盒 2.0     
1mL    C43(DE3) 种    
克必隆 eTS PCR 法 cDNA 合成试剂盒    130404-10    10 次