中国仓鼠卵巢细胞（亚系克隆）；CHO-HCV-NS5A说明书

中国仓鼠卵巢细胞（亚系克隆）；CHO-HCV-NS5A说明书【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

细胞名称 中国仓鼠卵巢细胞（亚系克隆）；CHO-HCV-NS5A说明书
形态特性  上皮细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性  CHO-HCV-NS5A细胞整合有丙型肝炎病毒的NS5A基因，能稳定表达NS5A蛋白，是HCV基础研究的*摸型。它由武汉大学病毒学国家重点实验室郭佳博士于2008年构建并保存。 
培养条件  DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium)  10%FBS
传代方法  1:3传代,2-3天传一代
传代情况 C19
冻存条件  基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR 
同工酶 同工酶鉴定
染色体 
使用权限 A类

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:    
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。   细胞到达客户手中，1个月内出现任何问题，导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤：
1）贴壁细胞传代：提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内，吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
2）悬浮细胞传代：将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min，弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。

天门冬氨酸洛美沙星    分子式：    484.453    分子量：     C17H19F2N3O3.C4    英文名称：    Lomefloxacin aspartate    CAS号：    211690-33-4    
 双酚AF    分子式：    336.23    分子量：     C15H10F6O2    英文名称：    Bisphenol AF    CAS号：    1478-61-1    
 溴甲酚绿    分子式：    698.01    分子量：     C21H14Br4O5S    英文名称：    Bromocresol green    CAS号：    76-60-8    
 酚酞    分子式：    318.33    分子量：     C20H14O4    英文名称：    Phenolphthalein    CAS号：    77-09-8-    
 分散橙 1    分子式：    318.33    分子量：     C18H14N4O2    英文名称：    Disperse orange 1    CAS号：    2581-69-3    
 碱性品红    分子式：    337.85    分子量：     C20H20ClN3    英文名称：    Fuchsin    CAS号：    632-99-5    
 二十八酸    分子式：    424.74    分子量：     C28H56O2    英文名称：    Twenty-eight acid    CAS号：    506-48-9    
 2,3-二氯丙烯    分子式：    110.97    分子量：     C3H4Cl2    英文名称：    2,3- two chloride    CAS号：    78-88-6    
 己烷雌酚    分子式：    270.37    分子量：     C18H22O2    英文名称：    Hexoestrol    CAS号：    84-16-2    
 环黄芪醇    分子式：    490.71    分子量：     C30H50O5    英文名称：    Ring of Astragalus    CAS号：    84605-18-5    
 曲安西龙    分子式：    434.5    分子量：     C24H31FO6    英文名称：    Qu Anxilong    CAS号：    124-94-7    
 加巴喷丁盐酸盐    分子式：    207.7    分子量：     C9H18ClNO2    英文名称：    Gabapentin hydrochloride    CAS号：    60142-96-3  人白细胞分离液 1.078    120906-200    200mL
柱式酵母质粒 DNAout    70202-50    50 次
250U    热启动 Tth DNA 聚合酶    
50 次    磁珠血液 DNAout    
30 次    一管式 DNA 胶回收试剂盒    
200mL    小鼠内皮细胞分离液 1.071    
活性氧检测试剂盒    18-0380-100    100 次
RNA 电泳液 ,10×    3150-100    100mL
100μL    山羊抗兔 IgG(H+L)，辣根过氧化物酶标记    
100g    DNA  Guanidine HCl( 盐酸胍 )    
250mL    非冻型细 RNA 保存液    
1mL    TG1 种    
Therminator II DNA 聚合酶    131196-100    100U
电泳甘油    90503-100    100mL
200U    T4 DNA 连接酶    
1mL    蛋白磷酸酶抑制剂混合液 2    
0.1mL×10    HB101 化学感受态细胞    
1000μL    小鼠抗 V5 标签单抗    
Xa 因子蛋白酶    120507-25    25μg
dATP 溶液，100mM    120615-0.5    0.5mL
500g    铁氰化