| 铭修（上海）生物科技有限公司
主营产品： 各种标准品、试剂、染色液、培养基、抗体、试剂盒、透析袋 细胞、实验室常规仪器 |
9
联系电话
| 铭修（上海）生物科技有限公司
主营产品： 各种标准品、试剂、染色液、培养基、抗体、试剂盒、透析袋 细胞、实验室常规仪器 |
联系电话
2023-5-22 阅读(96)
| 提 供 商 | 铭修（上海）生物科技有限公司 | 资料大小 | 83.1KB |
|---|---|---|---|
| 资料图片 | 下载次数 | 27次 | |
| 资料类型 | WORD 文档 | 浏览次数 | 96次 |
钙测试盒说明书
(货号：C004-2-1 MTB微板法)
免责声明: 测试前请仔细阅读说明书,预试后再进行批量实验,否则由此导致的后果用户自行承担!
一、测定原理：
样本中钙离子在碱性溶液中与甲基百里香酚蓝（MTB）结合，生成蓝色络合物；通过比色与同样处理的钙标准进行比较，可计算出样本中钙的含量。
二、试剂盒组成：(96T)
96T | 规 格 | 组 份 | 保 存 |
试剂一 | 10mL×1瓶 | MTB试剂 | 4℃避光保存6个月 |
试剂二 | 20mL×1瓶 | 碱性溶液 | 室温保存6个月 |
试剂三 | 1mL×1瓶 | 蛋白澄清剂 | 室温保存6个月 |
试剂四 | 1mL×1支 | 2.5mmol/L钙标准液 | 4℃避光保存6个月 |
1mmol/L钙标准液的配制:用去离子水将2.5mmol/L钙标准液进行2.5倍稀释(即2:3稀释) | |||
工作液Ⅰ的配制：试剂一:试剂二 = 1 : 2 的比例进行配制,现用现配。（测血清（浆）样本） | |||
工作液Ⅱ的配制：试剂一:试剂二:试剂三 = 10 : 20 :1 的比例进行配制,现用现配。（测组织、细胞样本） | |||
三、样本要求：
1、按常规检验要求采集处理样本, 样本可以是血清、血浆、组织匀浆及细胞、培养上清。
2、样本2～8℃可稳定3～4天,-20℃以下可稳定数月。
四、测定步骤：
（一）、血清（浆）、细胞培养液操作步骤:
1、操作表：
空白孔 | 标准孔 | 测定孔 | |
去离子水（μL） | 10 | ||
1mmol/L钙标准液（μL） | 10 | ||
血清（浆）（μL） | 10 | ||
工作液Ⅰ（μL） | 250 | 250 | 250 |
混匀，静置5分钟后，波长610nm，酶标仪比色，测各孔OD值。 | |||
2、计算公式：
C标准：标准品浓度，1mmol/L；N：样本测试前稀释倍数。
3、计算举例：
例1：大鼠血清（浆）样本用去离子水2.5倍稀释后取样10μL，按说明书操作测得：空白孔OD值：0.2428，标准孔OD值：0.3918，测定孔OD值：0.3699，则计算结果为：
例2：犬血清（浆）样本用去离子水2.5倍稀释后取样10μL ，按说明书操作测得：空白孔OD值：0.2428，标准孔OD值：0.3918，测定孔OD值：0.3902，则计算结果为：
例3：细胞上清样本用去离子水2.5倍稀释后取样10μL，按说明书操作测得：空白孔OD值：0.2428，标准孔OD值：0.3918，测定孔OD值：0.3639，则计算结果为：
（二）、组织或细胞匀浆的操作：
1、前处理:
准确称取组织重量按重量(g):体积(mL)=1:9的比例加入9倍体积的去离子水，冰水浴匀浆，2500转/分，离心10分钟，取10%的匀浆上清液待测；细胞样本收集好后按106个细胞加0.3-0.5mL的去离子水，超声破碎后，漩涡混匀，2500转/分，离心10分钟，取上清液待测。
2、操作表：
空白孔 | 标准孔 | 测定孔 | |
去离子水（μL） | 10 | ||
1mmol/L钙标准液（μL） | 10 | ||
组织匀浆上清液（μL） | 10 | ||
工作液Ⅱ（μL） | 250 | 250 | 250 |
混匀，静置5分钟后，波长610nm，酶标仪比色，测各孔OD值。 | |||
3、计算公式：
C标准：标准品浓度，1mmol/L；
Cpr：组织匀浆中蛋白浓度，gprot/L（prot指蛋白）。
4、计算举例：
取10%的大鼠脑组织上清液10μL ，按说明书操作测得：空白孔OD值：0.2428，标准孔OD值：0.3918，测定孔OD值：0.2689，并测得10%大鼠脑组织蛋白浓度为3.8475gprot/L,则计算结果为：
五、技术参数：
波长选择范围 | 600nm～630nm | 线性范围 | 0～2mmol/L |
批间差 | ≤6% | 批内差 | ≤4% |
保存条件 | 试剂盒4℃避光保存6个月 | ||
六、注意事项：
1、实验应避免钙污染,建议最好用一次性96孔板操作(本所有售)。
2、严重溶血、黄疸或脂血对结果有影响。
3、制备组织匀浆时，应选用去离子水作为匀浆介质,避免钙污染。
4、本试剂盒可上全自动/半自动生化分析仪
5、测定组织或细胞中钙离子含量，推荐同时测定总蛋白浓度（本所有售总蛋白定量试剂盒A045-1总蛋白试剂盒（双缩脲）、A045-2总蛋白试剂盒（考马斯亮蓝）、A045-3总蛋白试剂盒（BCA法））
6、本试剂盒仅用于科研。
7、实验前可先将96孔板用酶标仪读取并记录空板OD值,计算时每孔测得值减去对应空板值后代入计算。
附录Ⅰ：钙标准曲线的制备
1、前处理：
用去离子水将2.5mmol/L钙标准液稀释成不同的浓度：0.0625mmol/L、0.125 mmol/L、0.25mmol/L、0.5mmol/L、0.625mmol/L、1mmol/L、2mmol/L。
2、操作表：
空白孔 | 标准孔 | |
去离子水（μL） | 10 | |
不同浓度的钙标准液（μL） | 10 | |
工作液Ⅰ（μL） | 250 | 250 |
混匀，静置5分钟后，波长610nm，酶标仪比色，测各孔OD值 | ||
3、测定结果：
标准品浓度（mmol/L） | 测定OD值 | 绝对OD值 |
0 | 0.2428 | 0 |
0.0625 | 0.249 | 0.0062 |
0.125 | 0.259 | 0.0162 |
0.25 | 0.2809 | 0.0381 |
0.5 | 0.3195 | 0.0767 |
0.625 | 0.3376 | 0.0948 |
1 | 0.3918 | 0.1490 |
2 | 0.5352 | 0.2924 |
4、绘图如下:
注：以上标准曲线用户可以不做，直接用计算公式计算即可。
