糖原合成酶（Glycogen synthase，GCS）试剂盒说明书

测定意义：
GCS（ EC 2.4.1.11 ）催化 UDPG 和葡萄糖残基生成糖原和 UTP，以 α-1，4-糖苷键相连延长
糖链，是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶，是胰岛素作用的主要靶酶，对糖代谢的调节和血糖
稳态的维持具有重要作用。
测定原理：
GCS 催化 UDPG 和葡萄糖残基生成糖原和 UDP，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化
NADH 氧化生成 NAD + ，在 340nm下测定 NADH 下降速率，即可反映 GCS 活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 45 mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三：液体 41μL×1 支，4℃保存；
试剂四：粉剂×1 支， -20℃保存；
试剂五：粉剂×1 瓶， -20℃保存；
样本的前处理：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL
提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、 工作液的配制：临用前将试剂三和试剂四转移到试剂一中混合溶解待用；用不完的试剂
分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
3、 试剂五的配制：临用前在试剂五瓶中加入 2.5mL 试剂二充分溶解待用；用不完的试剂分
装后-20℃保存，禁止反复冻融。
4、 将工作液和试剂五置于 37℃预热 5 分钟。
5、 在 1mL 石英比色皿中加入 50μL 样本、50μL 试剂五和 900μL 工作液，立即混匀，记录
340nm 处初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2，计算 ΔA=A1-A2。
注意：在该试剂盒中，若 ΔA 大于 0.1，需将样本用提取液稀释适当倍数后测定，使 ΔA 小
于 0.1 可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。