EZ Trans Lipo细胞转染试剂（脂质体）

产品描述
EZ Trans Lipo细胞转染试剂（脂质体）（以下简称“EZ Trans Lipo"）为李记生物新研发的细胞转染试剂，EZ Trans Lipo以纳米脂质体包裹核酸通过特殊递送机制，把外源DNA、RNA、siRNA转入各类细胞，能转染贴壁细胞、悬浮细胞，还可用于siRNA和shRNA的基因敲除实验及基因表达研究。
经过对近百种细胞对比测试，EZ Trans Lipo在绝大部分受检细胞的转染效率、细胞毒性表现均与进口型产品一致或更优；具备转染效率高、细胞毒性低、适用细胞广、性价比高等优点。
订购信息

运输与保存
蓝冰运输。4℃保存，有效期12个月。
使用方法
贴壁细胞（以293T细胞、96孔板为例）
1.细胞准备
转染前一天用1酶消化、铺板，转染当天细胞密度达到3.0x10⁵ 个细胞/mL时可进行转染, 细胞汇合度达到70%-80%，保证活细胞>90%。
2.准备DNA-EZ Trans Lipo复合物
（1）取两支无菌EP管(平行样)，两个EP管各加入5 μL不含抗生素和血清的MEM细胞培养液，然后每一管各加入EZ Trans Lipo转染试剂0.15 μL，轻微吹吸使混和均匀。
（2）取一支无菌EP管，加入10 μL不含抗生素和血清的MEM细胞培养液，然后加入待转DNA或质粒，确保最终DNA量为0.2 μg，轻微吹吸使混和均匀。
（3）分别吸取将上述含有DNA的培养液5μL加入稀释好的EZ Trans Lipo的两个EP管中, 轻轻吹打、晃动使混和均匀，室温静置20 min形成DNA-EZ Trans Lipo 复合物（室温条件4 h内性质稳定）。
3.转染细胞
把DNA-EZ Trans Lipo 复合物全部加入到96孔板贴壁培养的293细胞中（试剂有重复样）。逐滴分散加入，轻微晃动。
4.细胞检测
加入DNA-EZ Trans Lipo复合物的细胞在 37℃ 培养1-3 d（无需特意更换培养液），根据实验设计实时观察或收获细胞检测。
 
表1：不同培养体积对应的待转DNA、EZ Trans、稀释液用量

 
 
 
悬浮细胞（以293FT细胞、1mL培养体积为例）
1.细胞准备
细胞进行转染当天，细胞密度达到2-2.5x10⁶ 个/mL时可进行转染，细胞重悬后汇合度达到70%-80%，保证活细胞>90%。悬浮细胞细胞转染可当天接种/铺板, 只要细胞状态稳定即可进行。
2.准备DNA-EZ Trans Lipo复合物
（1）取两支无菌EP管(平行样)，两个EP管各加入400μL不含抗生素和血清的MEM细胞培养液, 然每一管各加入EZ Trans Lipo转染试剂15μL，轻微吹吸使混和均匀。
（2）取一支无菌EP管，加入800μL不含抗生素和血清的MEM细胞培养液，然后加入待转DNA或质粒，确保最终DNA量为20μg，轻微吹吸使混和均匀。
（3）分别吸取将上述含有DNA的培养液400μL加入到稀释好的转染试剂培养液的两个EP管中, 轻轻吹打、晃动使混和均匀，室温静置20 min（室温条件4 h内性质稳定）。
3.转染细胞
把DNA-EZ Trans Lipo复合物800μL全部加入到1 mL悬浮培养的293FT细胞中（有重复样）。逐滴分散加入，轻微晃动。
4.细胞检测
加入DNA-EZ Trans Lipo复合物的细胞，37℃ 悬浮培养细胞1-3 d（无需特意更换培养液），根据实验设计实时观察或收获细胞检测。
注意事项
1.本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。
2.DNA-EZ Trans Lipo 的转染过程不要求特意更换，但由于双抗会影响重组蛋白的表达，为获得最佳表达效果，建议在细胞转染前2 h更换成不含抗生素和血清的培养基，在转后4-6 h换回含抗生素和血清的培养基。
3.质粒质量：请务必使用高质量转染级无内毒素质粒。通过260 nm光吸收测定DNA 浓度，260nm / 280nm比值确定 DNA 纯度（比值应该在1.8～2.0的范围之内）。如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。
4.细胞条件：使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。建议使用GIBCO或者李记生物的特级胎牛血清（Foetal Bovine Serum）（货号：AC03L055）培养细胞。
5.为了减少操作误差，上述操作步骤设定了一个重复平行样，用户可根据实验室目的和实验室条件调整。
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