illumina 中通量 病毒基因测序试剂盒

产品名称：illumina MiniSeq中通量病毒基因测序试剂盒

产品货号：FC-420-1004

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产品名称：Miniseq Mid Output Kit（300-cycles）基因测序试剂盒

产品货号：FC-420-1004

产品规格：

大输出                  2.4 Gb（MiniSeq Mid Output Kit (300-cycles)）

每次运行的大读数        高达800万

试剂类型                  簇生成，配对末端测序，合成测序

核酸类型                  DNA，RNA

系统兼容性                MiniSeq

技术                       测序

MiniSeq试剂盒   读数    套件尺寸（循环）  通量 (大)   2 × 150 通量   2 × 75 通量    1 × 75 通量      

MiniSeq中通量试剂盒     8 M      300              2.4 Gb         2.4 Gb             1.2 Gb           600 Mb  

Gb =千兆碱基，M =百万

产品介绍：

MiSeq测序试剂盒v2实现更高通量，减少MiSeq运行次数。MiSeq试剂盒v2保留了与v1试剂盒相同的即用型预装试剂盒，但改良了化学过程，提高簇密度，减少循环时间，并提高质量(Q)分值。目前还提供Micro和Nano规格的MiSeq试剂盒v2，适合低通量的应用。

改良化学过程后，循环时间更快、片段更长、输出更多

双表面成像实现的片段数是v1试剂盒单表面成像的两倍

使用500次循环的试剂盒可扩展片段长度

选择您应用的循环次数(50、300或500)

与升级的MiSeq系统结合使用，MiSeq试剂盒v2的双表面成像可使每个流动槽的通量翻倍。MiSeq试剂盒v2提供可生成较长片段长度的500次循环格式，以及广受欢迎的50次循环和300次循环格式。

MiSeq测序试剂盒v3的通量在所有MiSeq试剂盒中居*。这款v3试剂盒保留了与v1和v2试剂盒相同的即用型预装试剂盒，通过改良试剂，可提高簇密度和片段长度，并提高质量(Q)分值。借助MiSeq试剂盒v3，研究人员可:

使单次运行的输出翻倍

使用600次循环试剂盒，使片段长度zui长延伸至2 x 300碱基对

将片段数量增至2500万个，以开创新的应用

所有MiSeq试剂组件都采用RFID编码，并可巧妙地与MiSeq系统交互，以验证与用户定义的应用之间的兼容性。

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Illumina二代测序技术，边合成边测序（SBS），是广泛采用的新一代测序（NGS）技术，负责产生世界上90％以上的测序数据。

Illumina的二代测序技术称为边合成边测序(Sequencing-by-Synthesis,简称SBS)。SBS主要包括碱基延伸、荧光激发及信号收集、剪切等3个步骤。这3个步骤可以重复，循环进行。每循环一次测定一个碱基。想测定多少个碱基（即读长），就循环多少次。测序循环次数可以在软件里设定。到底测序多长合适，要根据项目性质和需求来决定。大多数情况下，SR实验（单端测序）测定1x50个碱基，PE实验（双端测序）测定2x150个碱基。

1 碱基延伸

Illumina测序试剂里所使用的dNTP级具特色，它们同时具有两个修饰基团：一个荧光基团，一个可逆终止基团。A、G、C、T 4种碱基分别标记4种不同的荧光基团，它们在不同波长的激光激发下，能够发射不同波长（即颜色）的荧光。荧光颜色与碱基种类一一对应，因此根据激发光的波长可以识别碱基。4种碱基的终止基团是一样的。由于终止基团的存在，所有dNTP每次都只能延伸1个碱基，无论给予多长的反应时间。又由于该终止基团是可逆的，在荧光信号收集完毕之后，可以用剪切剂切除该终止基团，使碱基恢复自然的可延伸状态，这时即可继续进行下一轮循环，再测定一个碱基。

可逆终止基团技术是Illumina二代测序的一大特色。它与桥式PCR技术一起，构成了Illumina二代测序的两大支柱，为稳定获得高质量的测序数据打下了坚实的基础。

2 信号采集

HiSeq系列测序仪具有红绿两根激光管，两个滤色片。它们两两组合，可以形成4种不同的激发波长，正好分别用于激发A、G、C、T 4种碱基。

Cluster上所标记的荧光基团在激光激发下产生的信号，可以用相机拍摄或者扫描的方式收集信号。扫描技术速度比较快，被X10系列采用。由于FC面积比较大，而且上表面和下表面要分别拍照，所以拍照过程相当耗时。对于经典的HiSeq 2000来说，一次测序循环所产生的荧光信号，需要大约40分钟的时间才能拍照收集完毕，时间比测序反应本身还要长。

3 剪切

荧光信号收集完毕后，关闭激光，用剪切剂去除测序引物的延伸产物上的碱基所标记的荧光基团和终止基团。两个修饰基团均被切除，一方面消去干扰荧光，一方面使链末端的碱基回复到自然的可延伸状态，为下一轮测序做好准备。

再重复合成、激发、收集等步骤，即可进行第二个碱基的测序。

测序循环可以重复多次。理论上可以一直重复，直到信噪比降低得无法有效识别碱基信号为止。由于荧光基团的发光效率持续不断在衰减，Taq酶的活性也在持续不断地衰减，所以实际上测序循环次数是有限的，大重复次数与sbs试剂的配方有关。测序的循环次数可以在软件设置过程中人为，这个重复次数就是每个测序片段的读长。目前，Illumina平台的读长有2x100 bp，2x125 bp，2x150 bp，2x300 bp等多种，其中2x150 bp用得zui广泛。

单端测序：单端测序(Single-read)首先将DNA样本进行片段化处理形成200-500bp的片段，引物序列连接到DNA片段的一端，然后末端加上接头，将片段固定在flow cell上生成DNA簇，上机测序单端读取序列。

双端测序：双端测序(Paired-end)方法是指在构建待测DNA文库时在两端的接头上都加上测序引物结合位点，在一轮测序完成后，去除一轮测序的模板链，用对读测序模块(Paired-End Module)引导互补链在原位置再生和扩增，以达到第二轮测序所用的模板量，进行第二轮互补链的合成测序。

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