illumina MiniSeq病毒基因测序试剂盒

产品名称：Miniseq High Output Reagent Kit（300-cycles）基因测序试剂盒

产品货号：FC-420-1003

产品规格：

大输出                         7.5 Gb（MiniSeq High Output Reagent Kit (300-cycles)）

每次运行的大读数        高达2500万

试剂类型                         簇生成，配对末端测序，合成测序

核酸类型                         DNA，RNA

系统兼容性                      MiniSeq

技术                                测序

产品介绍：

-illumina测序原理步骤:一、sample prep(样本准备):基因文库制备(一个基因组切断再加接头)二、cluster generaton(簇的形成):文库在测序芯片(流动池flowcell)上不断扩增，形成桥式PCR，再切掉反向链(reverse strand)，形成许多簇相同的正向序列(正向链forward strand)。Snipaste_2019-02-08_21-42-31.png image.png

三、sequencing(测序):荧光信号、可逆阻断终止技术、Sequences-by-Synthesis

四、data analysis(数据分析)具体内容:

一、基因文库:

image.png 接头不仅含有与测序芯片上互补的序列，有时还有index序列，由于测序芯片的强大，一个芯片可以同时测许多样本(动物、植物、微生物)，那如何区分测序数据来自哪个样本呢?加标签即加index序列，从而来区分不同的样本。

二、桥式PCR:文库种到测序芯片，并进行扩增的过程。

测序芯片:

Snipaste_2019-02-06_11-40-11.png

图片发自简书App 形成簇之后，加入带不同荧光标记的dNTP(含有叠氮基团)和聚合酶，使得带荧光标记的dNTP结合到测序链上，再进行激光扫描，得到荧光，推出结果。碱基结合到测序链并发出荧光信号的过程被称为Sequences-by-Synthesis。

image.png

image.png 由于叠氮基团的存在(可逆阻断终止技术)，一个循环只能延长一个碱基，即一个碱基结合到测序链上为一个循环，当结合上一个碱基后，把其他dNTP和酶用水冲掉，然后进行激光扫描，根据激光扫描颜色判断是哪个碱基，根据互补原则反推出结果，再切掉叠氮基团，进入新的循环，加入新的dNTP和酶，再延长碱基，冲掉dNTP和酶，再激光扫描。读取index(Barcode): 和读取测序链一样的原理，读取的目的是为了确定样本的来源。

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基因测序是一种新型基因检测技术，能够从血液或唾液中分析测定基因全序列，预测罹患多种疾病的可能性，个体的行为特征及行为合理。基因测序技术能锁定个人病变基因，提前预防和治疗。

基因测序相关产品和技术已由实验室研究演变到临床使用，可以说基因测序技术，是下一个改变世界的技术 。

基因测序只是基因检测的方法之一，其又叫基因谱测序，是上*的一种基因检测标准。

基因测序广为人知的还有针对唐氏综合征筛查的无创产前基因检测。只需要采集孕妇的外周血，通过对血液中游离DNA(包括胎儿游离DNA)进行测序，并将测序结果进行生物学分析，从而得出胎儿是否患有染色体数目异常的疾病，包括常见的21-三体综合征(唐氏综合征)、18-三体综合征(爱德华氏综合征)和13-三体综合征(Patau综合征)。

cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多，能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说，从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同，基因组DNA文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因，而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA。

真核生物基因组DNA十分庞大,其复杂程度是蛋白质和mRNA的100倍左右,而且含有大量的重复序列. 采用电泳分离和杂交的方法,都难以直接分离到目的基因.这是从染色体DNA为出发材料直接克隆目的基因的一个主要困难。

高等生物一般具有10^5种左右不同的基因,但在一定时间阶段的单个细胞或个体中,都仅有15%左右的基因得以表达,产生约15000种不同的mRNA分子.可见,由mRNA出发的cDNA克隆,其复杂程度要比直接从基因组克隆简单得多。

cDNA文库在研究具体某类特定细胞中基因组的表达状态及表达基因的功能鉴定方便具有特殊的优势，从而使它在个体发育、细胞分化、细胞周期调控、细胞衰老和死亡调控等生命现象的研究中具有更为广泛的应用价值，是研究工作中zui常使用到的基因文库。

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