 |
上海莱睿科学仪器有限公司
主营产品： 安捷伦液相色谱仪,气相色谱仪,尼高力红外光谱仪,IKA磁力搅拌器,TOMY高压灭菌锅 |
10
联系电话
|
上海莱睿科学仪器有限公司
主营产品： 安捷伦液相色谱仪,气相色谱仪,尼高力红外光谱仪,IKA磁力搅拌器,TOMY高压灭菌锅 |
联系电话
2017-2-16 阅读(1375)
苯胺类化合物是土壤中常有的有机污染物。苯胺类化合物常见于印 染、制药等土壤中，苯胺类是一种重要的有机化工原料，环境中的苯胺主要来源于橡胶、印染、制药、塑料、陶器上釉等工艺生产过程。环境中苯胺的残余量已引起 人们的极大关注，早已将其列人优先监测的污染物。主要引起高铁血红蛋白血症和肝、肾及皮肤损害。眼睛接触：可出现结膜角膜炎。皮肤接触：可引起皮炎。因此，建立简单、快速、灵敏、有效的苯胺类测定方法十分必要。
1 实验部分
1．1 仪器和试剂
1．1．1 仪器
Agilent 1200液相色谱仪；
色谱柱：Ultimate XB-C18 4.60×250mm,5 um .
1．1．2 试剂
1) 苯胺、邻硝基苯胺、间硝基苯胺、对硝基苯胺、2，4一二硝基苯胺、
2，6一二硝基苯胺、3，5一二硝基苯胺为色谱纯标样。
2) 二氯甲烷、丙酮、乙睛等均为色谱纯试剂。
3) 氢氧化Na、盐酸均为分析纯试剂。
4) 无水硫酸钠为分析纯试剂，用前在马弗炉中350烘4 h。
5) 氟罗里硅土100～200目色层分析用，进口分装，400℃下烘2h，置干燥器中备用。
1．2 样品制备
1．2．1 土样预处理
将土壤样品风干、研磨后过筛，称取土壤20g，加适量硅藻土拌匀，填人萃取池中，若萃取池中仍有空间，则用硅藻土填满,萃取。取下样品萃取液，于38℃用氮吹仪进行浓缩至lmL，待净化。
1．2．2 样品净化
苯胺类的预分离和浓缩：称取含水量10％的氟罗里硅土6g，制成环巳烷浆液，湿法装入内径为lOmm的玻璃柱中，新装好 的色谱柱应用二氯甲烷和丙酮冲洗数次，然后将预浓缩过的萃取液通过此玻璃柱，再用2mL的环巳烷洗K—D浓缩瓶三次并通过层析柱，用30mL二氯甲丙酮洗 脱液浸泡层析柱，再用30mL洗脱液洗脱柱中苯胺类，全部洗脱液接入氮吹瓶中于氮吹仪中浓缩定容到预定体积1mL，用Welchrom Syringe Filter Nylon 13mm 0.45um (Part Number:00802-02202,Lot Number:140108)过滤器对浓缩样品进行过滤，将此萃取液按下面色谱分析条件进行分析测定。
1．3 色谱分析条件
流动相为70％0．05mol／L乙酸胺缓冲液加30％乙睛，流速为0．8 mL／min；紫外检测器，鉴定波长为285 nm；进样量10 uL。色谱柱温l6℃。
1．4 标准曲线的绘制
先以甲醇为溶剂将苯胺类7种单标用重量法配制，充分溶解后，再分别量取一定体积混合成中间储备液后逐级稀释后液浓度见表1。
表1 苯胺类各成分混标的浓度
苯胺 | 邻硝基苯胺 | 间硝基苯胺 | 2,6-二硝基苯胺 | 3,5-二硝基苯胺 | 对硝基苯胺 | 2,4-二硝基苯胺 |
8.00 | 5.20 | 6.20 | 10.07 | 8.80 | 7.85 | 7.63 |
4.00 | 2.60 | 3.11 | 3.80 | 4.40 | 3.92 | 3.82 |
0.82 | 0.53 | 0.63 | 0.75 | 0.88 | 0.78 | 0.76 |
0.17 | 0.10 | 0.12 | 0.15 | 0.18 | 0.16 | 0.15 |
0.08 | 0.05 | 0.06 | 0.08 | 0.09 | 0.06 | 0.08 |
将以上苯胺类标准液依次测定后，绘制标准曲线见表2。
表2 苯胺类各成分标准曲线
苯胺类成分 | 标准曲线 | 相关系数 |
苯胺 | y=10.14x+0.2180 | 0.9999 |
邻硝基苯胺 | y=32.00x+0.4730 | 0.9999 |
间硝基苯胺 | y=23.04+0.2886 | 0.9998 |
2,6-二硝基苯胺 | y=10.90x+0.3597 | 0.9996 |
3,5-二硝基苯胺 | y=15.32x+0.3326 | 0.9998 |
对硝基苯胺 | y=6.097x+0.1444 | 0.9999 |
2,4-二硝基苯胺 | y=14.50x+0.3369 | 0.9997 |
1．5 定性和定量计算
利用保留时间定性，利用苯胺类混合标准样品做为外标，利用峰面积进行定量计算。
2 结果和讨论
2．1 色谱条件的确定
2．1．1 流动相的选择
因此选择70％0．05mol／L乙酸铵缓冲液加30％乙睛做流动相。其色谱图见图2。
图l 65％0．05mol／L乙酸铵缓冲液和35％ 甲醇流动相
(1一苯胺、2一邻硝基苯胺、3一间硝基苯胺、4一对硝基苯胺、5— 2，4一二硝基苯胺、6—2，6一二硝基苯胺与7—3，5一二硝基苯胺)
图2 70％ 乙酸铵缓冲液和30％ 乙睛流动相
(1一苯胺、2一邻硝基苯胺、3一间硝基苯胺、4一对硝基苯胺、5— 2，4一二硝基苯胺、6—2，6一二硝基苯胺、7—3，5一二硝基苯胺)
2．1．3 柱温的选择
参考本地气温的变化规律，选择16℃作为该色谱柱的适宜温度。
2．1．4 准确度、精密度和检出限
依据美国EPA SW一846中规定的方法检出限，连续分析7个接近检出限浓度的实验室空白加标样品，分别在7个20g空白土壤中加入苯胺类混标，计算其标准偏差S，再依据公式MLD=St( n-1,0.99)计算出检出限，在99％的置信区间，7个分析值的偏差均非常小，S=0.012-0.032，此时，t（6．0．99)=3.143，其中，为
t( n-1,0.99)是置信度为99％、自由度为n一1时的t值；其中n为重复分析的样品数。
经实验确定，取7个20g空白土壤，分别进行7次低浓度加标回收测定，加标量为表1中浓度按苯胺类混标100uL的平均加标回收率为63.8％ -92.7％，相对标准偏差(RSD)≤4．8％。其检出限与回收率结果见表3。
表3 精密度、加标回收率与检出限(n=7)
苯胺类 | 平均回收率/% | (x )/ug | RSD/% | 检出限（mg/Kg） |
苯胺 | 91.8 | 0.73 | 2.9 | 5×10-4 |
邻硝基苯胺 | 87.10 | 0.65 | 4.8 | 1×10-4 |
间硝基苯胺 | 78.0 | 0.60 | 4.4 | 1×10-4 |
2,6-二硝基苯胺 | 64.1 | 0.68 | 1.8 | 2×10-4 |
3,5-二硝基苯胺 | 92.8 | 0.79 | 3.2 | 2×10-4 |
对硝基苯胺 | 68.4 | 0.62 | 3.6 | 2×10-4 |
2,4-二硝基苯胺 | 69.0 | 0.64 | 3.0 | 2×10-4 |
2．1．5 实际样品与空白测定
土壤取样进行监测分析，其空白与样品色谱图见图3、图4，其空白土壤均没有苯胺类检出，实际样品仅检出了苯胺和间硝基苯胺，其中苯胺含量为0．006mg／kg间硝基苯胺含量为0．O03mg／kg。
三．结论
液相色谱仪可以快速、准确的测定每种化合物的含量。 结果准确、可靠。
