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纯度 | 99.99% | 供货周期 | 现货 |
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规格 | 50μl/支 | 货号 | XY9030 |
应用领域 | 医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业 | 主要用途 | BJ5183是一种具有较高重组活力的大肠杆菌菌株,是目前腺病毒系统最常用的感受态 |
BJ5183 Electroporation-Competent Cell
产品规格
BJ5183 50μl/支
pUC19 (control vector,10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期): -80℃(6个月)
基因型
endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (StrR)
BJ5183 Electroporation-Competent Cell产品说明
BJ5183是一种具有较高重组活力的大肠杆菌菌株,是目前腺病毒系统常用的感受态细胞。BJ5183菌株含有sbcBCrecBC双重突变,赋予BJ5183细胞较强的重组能力,有利于转入的目的基因与腺病毒质粒{pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3 deleted)]或pAdeasy-2[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3/E4 deleted)]}的重组。endA1(缺失核酸内切酶)的突变有利于重组DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。StrR赋予BJ5183菌株链霉素抗性。BJ5183电击感受态细胞适用于普通质粒和大质粒的构建,经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>1010cfu/μg DNA。
操作方法
1. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟,待其沥干水分,正置5分钟,使乙
醇充分挥发,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖,冰中
静置5分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的BJ5183电击感受态细胞插入冰中5 分钟,待其融化,加入目的DNA (质粒或连接产物)
并用手打EP管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。
A. 测定转化效率使用1 μl 10 pg/μl的对照质粒 pUC19;
B. 对于连接产物,请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重
悬,DNA浓度不超过100 ng/μl,体积不超过5 μl/50 μl感受态。
3. 用200 μl枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中,避免产生气泡,盖上杯盖。
4. 启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 Ω,V=1.8 kV (此为BioRad 电转仪推荐参数,也可按所用
电转仪推荐的参数操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中。
5. 2分钟后从冰中取出电击杯,放室温,加入700 μl不含抗生素的无菌S.O.C. 培养基(室温),用1ml
枪吹吸电击杯底部数次混匀后,转移到50 ml离心管(BD Falcon 50 ml锥形离心管等),向离心管中
补加S.O.C. 培养基至10 ml。37℃,225 rpm复苏60分钟。
6. 5000 rpm离心一分钟收菌,重悬后取100-200 μl涂布到含相应抗生素的S.O.C平板上(因菌量较大,
若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个)。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
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