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DH10B-Plus Electroporation-Competent Cell

产品规格

DH10B-Plus                       50μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                                        10μl

保存条件(保质期)：                                                 -80℃（6个月）

基因型

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) ϕ80lacZΔM15ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galE15 galK λ-rpsL nupG Hte(Tet^R)

DH10B-Plus Electroporation-Competent Cell产品说明

DH10B-Plus电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。DH10B-Plus菌株来源于DH10B菌株，在DH10B菌株中引入Hte突变，提高了细胞膜的通透性和对瞬时高压的耐受进而提高了电击转化效率。DH10B- Plus菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA (无论真核生物还是原核生物的基因组DNA都能被高效的转入DH10B- Plus中)。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取，ϕ80dlacZ ΔM15标记的存在使DH10B-Plus可用于蓝白斑筛选。DH10B-Plus电击感受态细胞具有链霉素和四环素抗性，适用于大质粒的构建或各种文库构建，经特殊工艺处理，pUC19质粒检测转化效率>2×10¹⁰ cfu/μg DNA。

操作方法

1. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。

2. 取-80℃保存的DH10B-Plus电击感受态细胞插入冰中5 分钟，待其融化，加入目的DNA (质粒或连接产物)并用手打EP管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。

        A. 测定转化效率使用1 μl 10 pg/μl的对照质粒 pUC19；

        B. 对于连接产物，大部分公司的T4连接酶反应体系或50度反应重组体系可与DH10B-Plus电击感受态混合后电击转               化，无需进行DNA纯化，但DNA浓度不能过高，DNA浓度不超过100 ng/μl，体积不超过5 μl/50 μl感受态。

        C. 对盐浓度较高的DNA溶液或反应体系请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM                   EDTA)重悬，然后与DH10B-Plus电击感受态混合进行电击转化。

3. 用200 μl枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。

4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。

5. 2分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入700 μl不含抗生素的无菌S.O.C. 培养基（室温），用1ml 枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到50 ml离心管（BD Falcon 50 ml锥形离心管等），向离心管中补加S.O.C. 培养基至10 ml。37℃，225 rpm复苏60分钟。

6. 5000 rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200 μl涂布到含相应抗生素的S.O.C平板上（因菌量较大，若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个）。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养13-17小时。