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纯度 | 99.99% | 供货周期 | 现货 |
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规格 | 50μl/支 | 货号 | XY9039 |
应用领域 | 医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业 | 主要用途 | EPI300电击感受态细胞只能用于电击转化,不能用于热激转化。EPI300细胞含 |
EPI300 Electroporation-Competent Cell
产品规格
EPI300 Electroporation-Competent Cell 50μl/支
pUC19 (control vector,10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期): -80℃(6个月)
基因型
F – mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara,leu)7697 galU galK λ – rpsL nupG trfA dhfr.
产品说明
EPI300电击感受态细胞只能用于电击转化,不能用于热激转化。EPI300细胞含有一个突变的trfA基因,该基因表达出的蛋白产物可以促进含有ori V复制子的质粒的高拷贝扩繁,诱导剂Ⅰ可以诱导trfA基因的表达。当含有ori V复制子质粒的EPI300细胞在LB/2YT或SOB培养基中生长时,trfA基因的表达被抑制,ori V复制子质粒的拷贝数维持在很低的水平;当在培养基中加入诱导剂Ⅰ,ori V复制子质粒的拷贝数可维持在很高的水平,提高了质粒产量。因此EPI300菌株可以降低ori V复制子质粒的拷贝数,特别适合于各种不稳定 DNA 或毒性基因的克隆。 [mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型使EPI300菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA(例如:哺乳动物基因组DNA)。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。lacZΔM15 标记的存在使EPI300可用于蓝白斑筛选,rpsL赋予其链霉素抗性。此外,EPI300电击感受态细胞转化效率*,特别适用于文库构建,唯地生物生产的EPI300电击感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>2×1010 cfu/μg DNA。
操作方法
1. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟,待其沥干水分,正置5分钟,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的EPI300电击感受态细胞插入冰中5 分钟,待其融化,加入目的DNA (质粒或连接产物)并用手打EP管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。
A. 测定转化效率使用1 μl 10 pg/μl的对照质粒 pUC19;
B. 对于连接产物,大部分公司的T4连接酶反应体系或50度反应重组体系可与EPI300电击感受态混合后电击转化,无 需进行DNA纯化,但DNA浓度不能过高,DNA浓度不超过100 ng/μl,体积不超过5 μl/50 μl感受态。
C. 对盐浓度较高的DNA溶液或反应体系请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬,然后与EPI300电击感受态混合进行电击转化。
3. 用200 μl枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中,避免产生气泡,盖上杯盖。
4. 启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 Ω,V=1.8 kV (此为BioRad 电转仪推荐参数,也可按所用电转仪推荐的参数操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中。
5. 2分钟后从冰中取出电击杯,放室温,加入700 μl不含抗生素的无菌S.O.C. 培养基(室温),用1ml 枪吹吸电击杯底部数次混匀后,转移到50 ml离心管(BD Falcon 50 ml锥形离心管等),向离心管中补加S.O.C. 培养基至10 ml。37℃,225 rpm复苏60分钟。
6. 5000 rpm离心一分钟收菌,重悬后取100-200 μl涂布到含相应抗生素的S.O.C平板上(因菌量较大,若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个)。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养13-17小时。
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