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纯度 | 99.99% | 供货周期 | 现货 |
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规格 | 100μl/支 | 货号 | XY9088 |
应用领域 | 医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业 | 主要用途 | EHA105菌株由EHA101菌株改造而来,为C58型背景,核基因中含有筛选标签 |
EHA105 Chemically Competent Cell
产品规格
EHA105: 100μl/支
pCAMBIA2301(control vector,10ng/μl ) 10μl
保存条件(保质期): -80℃(12个月)
基因型
C58 (rifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine
EHA105 Chemically Competent Cell产品说明
EHA105菌株由EHA101菌株改造而来,为C58型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105 (pTiBo542DT-DNA),此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。EHA105菌株适用于水稻、烟草等植物的转基因操作。本公司生产的EHA105化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,pCAMBIA2301质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
操作方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化,处于冰水混合状态时插入 冰中。
2.每100 μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA(转化效率较高,次使用前做预实验确定所加质粒的量),用手打管底混匀,依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700 μl无抗生素的LB或YEB液体培养基,于28℃振荡培养2~3小时。
4. 6000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天
(当平板只含有50 μg/ml kan 时,28℃培养48 h即可;平板中同时加入50 μg/ml kan,20 μg/ml rif 时,需28℃培养60 h;如果使用的平板含有50 μg/ml rif 则需要28℃培养72-90 h)。
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