胃蛋白酶活性检测试剂盒

胃蛋白酶由胃粘膜主细胞分泌，分解食物中蛋白质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别，慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。胃蛋白酶可催化血红蛋白水解，水解产物酪氨酸在 275nm 下有特征吸收峰。通过测定吸光值的变化来计算酶活。

胃蛋白酶活性检测试剂盒

一、粗酶液提取：称取约 0.1g 组织或者 0.1ml 胃液，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。10000 rpm 4℃离心 10 分钟，取上清，即粗酶液，置冰上待测。

二、测定步骤：

1. 酶标仪预热 30min 以上，调节波长到 275 nm，蒸馏水调零。

2. 按下表操作：测定管 对照管样本（μL） 20 - 试剂一（μL） 100 100 混匀，37℃保温 10min。试剂三（μL） 100 100 摇匀 1min。样本（μL） - 20 混匀后 10000rpm 4℃ 离心 10min，取上清用石英比色皿/96 孔 UV 板测定 A275nm。

1、用石英比色皿

按样本蛋白浓度计算：活性单位（U）定义：37℃下每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。胃蛋白酶（U/mg prot）=（∆A÷Ɛ÷d×V 反总）÷（Cpr×V 样本）÷T = 0.786×∆A÷Cpr （2） 按样本鲜重计算：活性单位（U）定义：37℃下每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。胃蛋白酶（U/g）胃蛋白酶（U/g 鲜重）=（∆A÷Ɛ÷d×V 反总）÷（W×V 样本÷V 提）÷T =0.786×∆A÷W。 Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；V 反总：反应总体积，0.22mL；V 提：提取液体积，1mL；T：催化反应时间，10min；V 样本：加入样本体积，0.02mL；Ɛ：酪氨酸吸光系数，1.4 mol-1·mL·cm-1 ；d：光程，1cm。

2、用 96 孔 UV 板按样本蛋白浓度计算：活性单位（U）定义：37℃下每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。胃蛋白酶（U/mg prot）=（∆A÷Ɛ÷d×V 反总）÷（Cpr×V 样本）÷T = 1.57×∆A÷Cpr （3） 按样本鲜重计算：活性单位（U）定义：37℃下每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。胃蛋白酶（U/g）胃蛋白酶（U/g 鲜重）=（∆A÷Ɛ÷d×V 反总）÷（W×V 样本÷V 提）÷T =1.57×∆A÷W。 Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；V 反总：反应总体积，0.22mL；V 提：提取液体积，1mL；T：催化反应时间，10min；V 样本：加入样本体积，0.02mL；Ɛ：酪氨酸吸光系数，1.4 mol-1·mL·cm-1 ；d：光程，0.5cm。