总巯基含量检测试剂盒

生物体内巯基主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质，而且参与活性氧清除，后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和 GSH 含量，能够间接测定蛋白质巯基含量。

巯基基团与 5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在 412nm 处有吸收峰。

总巯基含量检测试剂盒

样品的制备：

1. 按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 8000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2. 血清，培养液：直接测定。

操作步骤：

1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长 412nm，蒸馏水调零。

2、操作表对照管 测定管样品（μL） 40 40 试剂一（μL） 150 150 试剂二（μL） 10 H2O（μL） 10 混匀，25℃静置 10min，于微量石英比色皿/96 孔板，测定 412nm 吸光值。ΔA=A 测定-A 对照。

计算公式：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下总巯基标准曲线：y = 1.7236 x，R 2 = 0.9994

1. 组织：

（1）按样本重量计算总巯基含量（μmol/g）= 1.7236 A ×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）= 2.9×ΔA÷W

（2）按样本蛋白浓度计算总巯基含量（μmol/mg prot）= 1.7236 A ×V 反总÷(V 样×Cpr) = 2.9×ΔA÷Cpr

2. 血清、培养液：

总巯基含量（μmol/L）= 1.7236 A ×V 反总÷V 样×103 =2900×ΔA V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样品体积，0.04mL；V 样总：加入提取液体积， 1mL；W：样品质量，g ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；103 ：1mmol/L=103 μmol/ L

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

总巯基标准曲线：y = 0.8618x，R 2 = 0.9994 1.

组织：（1）按样本重量计算总巯基含量（μmol/g）= 0.8618 A ×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）=5.8×ΔA÷W

（2）按样本蛋白浓度计算总巯基含量（μmol/mg prot）= 0.8618 A ×V 反总÷（V 样×Cpr）=5.8×ΔA÷Cpr

2. 血清、培养液：总巯基含量（μmol/L）= 0.8618 A ×V 反总÷V 样×103 =5800×ΔA V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样品体积，0.04mL；V 样总：加入提取液体积， 1mL；W：样品质量，g ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；103 ：1mmol/ L=103 μmol/ L