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产品介绍
Hieff® Multiplex PCR Kit（Mg2+ free）
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Hieff® Multiplex PCR Kit（Mg2+ free） | 13278ES60 | 100 T | 875.00 |
Hieff® Multiplex PCR Kit（Mg2+ free） | 13278ES76 | 500 T | 3165.00 |
产品描述
本产品适用于多重PCR实验。Hieff® Multiplex PCR Kit（Mg2+ free）由多重PCR酶制剂与不含Mg2+的2×扩增缓冲液组成，在进行扩增反应时，可在反应体系中根据需求添加适量Mg2+。该产品的扩增具有高均一性、高特异性和高灵敏度的特点，可以对20对及以上引物体系进行特异、均一的扩增反应。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 产品编号/规格 | |
13278ES60 (100T) | 13278ES76 (500T) | ||
13278-A | Hieff® Multiplex PCR Enzyme | 100 μL | 500 μL |
13278-B | 2×Hieff® Multiplex PCR Buffer (Mg2+ free) | 2×1.25 mL | 10×1.25 mL |
13278-C | MgCl2 (25 mM) | 1×600 μL | 3×1 mL |
【注】:13278-A组分避免反复冻融。
运输与保存方式
冰袋运输。-20℃储存，有效期1年。
反应体系
组分 | 体积 (μL) | 终浓度 |
2×Hieff® Multiplex PCR Buffer (Mg2+ free) | 25 | 1× |
Hieff® Multiplex PCR Enzyme | 1 | - |
Primer mix | x | 0.1 μM-0.5 μM |
模板DNA | DNA总量：1 ng-200 ng | - |
MgCl2（25 mM） | y | 1-5 mM |
无菌超纯水 | up to 50 | - |
【注】: 1）DNA量和引物浓度均为推荐起始投入量和浓度，可根据具体实验情况进行调整，选择适投入量和浓度；
2）引物浓度：建议每条引物的浓度在0.1 μM-0.5 μM参考范围内进行调整；
3）Hieff® Multiplex PCR Buffer（Mg2+ free）中已经包含扩增所需要的dNTP、盐离子等，但不包含Mg2+，需在反应体系中根据实验需求添加适量Mg2+。
扩增程序
循环步骤 | 温度（℃） | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94 | 1 min | 1 |
变性 | 94 | 30 sec | 15-45 |
退火 | 50-60 | 60 sec | |
延伸 | 72 | 60 sec/kb | |
终延伸 | 72 | 10 min | 1 |
【注】: 1）在PCR仪上设置上表中的反应程序进行多重PCR反应（设置热盖温度至105℃左右）
2）使用本产品获得的扩增产物需添加Loading buffer后用于电泳检测。
3）延伸时间以长扩增片段为准，可适当延长延伸时间，但要避免过长时间带来的非特异性扩增。
实验案例分享
以人基因组DNA为模板，使用10对引物进行多重PCR反应，分别扩增97 bp、139 bp、181 bp、212 bp、268 bp、331 bp、415 bp、507 bp、741 bp和1172 bp的目的片段。
扩增体系配制 | 扩增程序设置 | ||||||
组分 | 体积 | 终浓度 |
| 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
Hieff® Multiplex PCR Buffer (Mg2+ free) | 25 μL | 1× |
| 预变性 | 94℃ | 1 min | 1 |
Hieff® Multiplex PCR Enzyme | 1 μL | - |
| 变性 | 94℃ | 30 sec | 35 |
Primer mix | 10 μL | 0.1 μM-0.5 μM |
| 退火 | 60℃ | 60 sec | |
模板DNA（100 ng/μL） | 1 μL | 2 ng/μL |
| 延伸 | 72℃ | 60 sec | |
MgCl2（25 mM） | 5 μL | 2.5 mM |
| 终延伸 | 72℃ | 10 min | 1 |
无菌超纯水 | to 50 μL | - |
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电泳检测
2%琼脂糖凝胶；130 V；电泳时间1 h。
实验结果
Lane 1：100bp DNA marker
Lane 2-3：10重PCR产物
HB200512
