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试剂盒检测方法内容包括了哪些?

阅读:1116          发布时间:2014-9-18

    根据小鼠elisa试剂盒的检测目的和操作方式的分析来看有三种基本方法,且在实验前要有相关的准备与了解,那么试剂盒的检测方法内容包括了哪些呢?上海沪鼎说给您听:
 1. 双抗体(原)夹心法:
    检测抗原(体)的常见方法,应用针对抗原两个不同决定族的两种单抗分别作为固相载体和酶标抗体检测溶液中的抗原(适用于二价以上抗原,不能测 小分子半抗原)。
 2. ELISA试剂盒间接法:
    检测抗体的方法,利用酶标记的抗抗体(第二抗体)检测已与固相抗原结合的抗体。
 3. 竞争法检测:
    抗原或小分子半抗原、抗体,以测抗原为例,使待测抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合,结果如待测抗原含量越多,与固相抗体结合的酶标抗原就越少,显色越浅,二者呈负相关。
    
·ELISA试剂盒分类有这两种
  1. 采用双抗体二步夹心法测定标本中各种动物相关指标的水平。
  2. 采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
   ELISA试剂稳定、易保存、操作简便,既可以做定性试验也可以做定量分析等优点,已广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域。影响因素较多,加强质量管理才能充分发挥其方法学的优点。
·在小鼠elisa试剂盒实验开始之前,您需要准备:
  1. 应将盒内各试剂取出,室温放置至少30分钟。
  2. 准备各种实验仪器及材料,如微量移液器,吸头,医用蒸馏水等。
  3. 浓缩洗液与医用蒸馏水1:19倍稀释后成为应用洗涤液。
  4. 浓缩样品稀释液与医用蒸馏水1:4倍稀释成应用样品稀释液。 
  5. 用ELISA试剂盒应用样品稀释液来稀释样品,按照1:100的体积比来稀释样品如10μl的样品加入到1ml的应用样品稀释液中,充分混匀待用。
    
·ELISA试剂盒洗涤次数的经验法则
    洗涤次数越多,背景越低。太多次的洗涤会降低信号强度,使其难以测定。通常的做法是在每次抗体或抗原孵育后重复洗涤三次。不过ELISA板的商会对洗涤次数提出建议。一般而言,商包被平板需要的洗涤次数比用户包被的平板要少。对于用户包被的ELISA板,必须优化洗涤次数。
    控制洗涤量和洗涤次数的另一种方法是加入过量的洗涤液。一般来说,96孔板的每个孔能容纳330至460μl。不过,有些自动化洗板机可设置程序,分配远远超出这个量的洗涤液,比如1ml。它是如何做到的呢?上海沪鼎生物技术表明:其实很简单,就是在分液的同时打开吸液功能。换句话说,随着分液器分配更多的液体,抽吸器也将液体吸出。这种技术能增加洗涤量,但不会溢出到其他孔中。
·ELISA试剂盒抽吸
    还有一些参数会影响洗涤步骤的效果。这些参数包括吸液高度和吸入位置,这两者都能调整,以降低背景和差异。残留液体中包含未结合的抗原或抗体,它们会增加背景信号。残留量越小,残留液体越少,转移到下一步的干扰液体也就越少。
    吸液高度会明显影响残留量;如果洗涤吸头与反应孔底部的距离稍大,那就会让残留量急剧增加。反之,如果试剂盒洗涤吸头压着反应孔底部,那么也会使吸液效率降低,残留量增加。
       

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