替米考星ELISA检测试剂盒

一、原理

替米考星ELISA检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法定量检测样品中替米考星的残留量。

二、适用范围

定量检测组织样本中替米考星残留。

三、替米考星ELISA检测试剂盒特点及技术指标

* 检 测 时 间 ： 30min

  试剂盒灵敏度： 0.1ppb(µg/kg)

* 试剂盒检测纯阴性样本的背景值＜0.04ppb；

* 样品处理方法简洁，符合率大于95%；

试剂盒检测样本的灵敏度和准确度：

试剂盒交叉反应率：

四、所需材料

仪器：微孔板酶标仪450 nm/630 nm、均质器、振荡器、离心机、天平（感量0.01 g）、离心管（5 mL, 50 mL）

微量移液器：单道 1µL～10 µL、10 µL～100µL

多道 50µL～300µL

试剂：去离子水、乙腈

五、 试剂盒组成

*注：5个标准品A、B、C、D、E浓度分别为：0 ppb, 0.1 ppb, 0.3 ppb, 0.9 ppb, 2.7 ppb，A、B各1 mL，C、D、E各0.5 mL，直接使用。

六、溶液配制

配液1: 洗涤工作液

用去离子水将20×浓缩洗涤液按1 : 19体积比进行稀释，用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月，用前一天取出回温。

配液2:  1 ×替米考星样品稀释液    

用去离子水将2×替米考星样品稀释液按1:1体积比进行稀释。配好的1×替米考星样品稀释液在4℃环境可保存一个月，用前一天取出回温。

配液3:  1 ×替米考星样品提取液    

用去离子水将10×替米考星样品提取液按9:1体积比进行稀释。配好的1×替米考星样品提取液在4℃环境可保存一个月，用前一天取出回温。

七、样本前处理                                                   

样本处理前须知：

① 处理完的样品应及时进行下步检测，实验中必须使用一次性吸头，吸取不同试剂时要更换吸头。② 样本数目超过8个时推荐使用排枪加样。

组织（稀释倍数：100)

• 称取糊状样品1.0g ± 0.05g至50mL离心管中，加入2mL 1×替米考星样品提取液， 震荡提取1min；
• 再加入2 mL乙腈，震荡提取1min；
• 4000rpm离心5min.；
• 小心取出上层溶液50μL至另一装有950μL 1×替米考星样品稀释液的离心管中，震荡混匀，取50μL用于分析。

八、 酶标免疫测定程序

• 将所有所需试剂从冷藏环境中取出，待其*回升至室温后方可使用，根据体积大小不同取出回温的时间从1小时~2小时。注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
•  按标准品和样品双孔平行的数量使用微孔。
•  加标准品/样品、酶、抗体：加标准品/样品50µL到对应的微孔中，加入替米考星酶标物50µL/孔，加入替米考星抗体50µL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应20min。
•  洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，

加入洗涤工作液300 µL/孔，每次静置20s，甩去孔内液体，重复洗涤3次，后一次用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。

•  显色：加入底物液A液50 µL/孔，再加底物    

   液B液50 µL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜             

     盖板后置37℃避光环境中反应10min。

• 测定：加入终止液50µL/孔，用酶标仪立即  测定450/630nm处的吸光度值。

九、 结果判定

以标准品百分吸光率为纵坐标，以替米考星标准品浓度（ppb）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中替米考星实际浓度。（详见试剂盒专业分析软件，以便进行大量样本的分析计算。）

十、 注意事项

① 根据体积大小不同取出回温的时间从1 h~3 h，体积15 mL以上的先从冷藏环境取出回温，

② 洗板拍干后应立即进行下一步操作。

③ 反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。

④ 不使用过了有效期的试剂盒，不交换使用不同批号的试剂。

⑤ 0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。

⑥ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色    时间为15min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到20min，反之则减短反应时间。

⑦ 底物液B液长期使用变为浅蓝色时，请放心使用，不影响检测结果。

十一、贮藏条件及保存期

    贮藏条件： 2～8℃

保 质 期： 12个月