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福尔根DNA染色液 操作指导
最近更新时间：2016-5-12
提 供 商：北京诺博莱德科技有限公司资料大小：7.5KB
文件类型：JPG 图片下载次数：110次
资料类型：未知文件浏览次数：404次
产品简介：
脱氧核糖核酸(DNA)染色方法有Feulgen法、甲基绿-派洛宁法、吖啶橙荧光法等，其中zui经典的是Feulgen法,该法是一种经典的酶组织化学法。
NobleRyder Feulgen Stain 原理在于DNA经温和的弱酸(例如盐酸)水解后，嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键被打开，并且使脱氧核糖与磷酸间的磷酯键断开，在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。醛基在原位与 Schiff试剂结合，形成紫红色化合物，使细胞内含有DNA的部位呈紫红色。紫红色的产生是因为反应产物的分子内有醌基(醌基是一个具有颜色的发色团，所以凡含有DNA的部位就呈紫红色。该水解作用不影响核糖-嘌呤结合键，因此RNA用此法处理后则分解，所以该法不适用于证明RNA。
产品组成：
编号 名称 | D6610 3×50ml | Storage | ||
试剂(A):Schiff Reagent | 50ml | 4℃ 避光 | ||
试剂(B): SO2水 | B1:弱酸溶液 | 50ml | RT | |
B2:亚硫酸盐溶液 | 50ml | RT | ||
使用说明书 | 1份 | |||
自备材料：
1、蒸馏水、
2、恒温箱
操作步骤(仅供参考)：
(一)石蜡切片染色：
1、组织固定：Carnoy固定石蜡切片较好，10%福尔马林亦可，不宜采用Bouin固定液。
2、配制弱酸工作液:按弱酸溶液:蒸馏水=1:4配制，即取1份弱酸溶液、4份蒸馏水，充分混合，即获得弱酸工作液。
3、石蜡切片脱蜡至蒸馏水。
4、入弱酸工作液，室温浸洗一下。
5、切片入预热至60℃的弱酸工作液，孵育8min。
6、切片入室温的弱酸工作液中冲洗1min。
7、蒸馏水冲洗。
8、切片入Schiff Reagent，室温避光染色30~60min。
9、在上述染色过程中，配制SO2水工作液。按弱酸溶液:亚硫酸盐溶液:蒸馏水=1:5:94 配制，即取弱酸溶液1份、亚硫酸盐溶液5份、蒸馏水94份，充分混合，即配即用。
10、用新鲜配制的SO2水工作液洗切片3次，每次90s。
11、蒸馏水中洗净。经系列乙醇脱水。二甲苯透明并封片。
(二)冰冻切片染色：
1、冰冻切片预处理：取1份乙酸、3份无水乙醇混合即为固定液，固定10min。
2、由无水乙醇脱水--逐级下行—蒸馏水。
3、配制弱酸工作液：按弱酸溶液:蒸馏水=1:4配制，即取1份弱酸溶液、4份蒸馏水，充分混合，即获得弱酸工作液。
4、余下步骤同上述石蜡切片染色。
染色结果：
细胞核内DNA | 红紫色 |
阴性对照：将同样切片经上述步骤，只有步骤5改为入室温弱酸工作液，孵育15min。结果为细胞核DNA阴性。
注意事项：
1、水解时间很重要，并且应使用恰当的固定时间。不同的固定液水解时间不一样。
固定液 | 水解时间(min) |
Carnoy 固定液 | 8min |
Helly 固定液 | 8min |
Susa 固定液 | 18min |
8min | |
Zenker 液 | 5min |
2、注意Schiff Reagent的纯净程度，若变浅粉红亦可考虑使用，颜色变红则弃用。
3、去除切片上多余Schiff Reagent的方法以SO2水洗为好。
4、应做阴性对照试验。
有效期：6个月有效。