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详细介绍
一、细胞基本属性：
细胞名称 | 兔骨髓单核细胞 | 商品货号 | A01X2185 |
组织来源 | 骨髓 | 产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 |
种属来源 | 兔 | 传代特性 | 不增殖；不传代 |
生长特性 | 贴壁 | 细胞形态 | 巨噬细胞样 |
包被条件：
培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率：每2-3天换液一次
传代比例：不传代
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%
细胞简介 |
兔骨髓单核细胞分离自骨髓；骨髓是机体的造血组织，位于身体的许多骨骼内。成年动物的骨髓分两种：红骨髓和黄骨髓。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞。血小板有止血作用，白细胞能杀灭与抑制各种病原体，包括细菌、病毒等；某些淋巴细胞能制造抗体。因此，骨髓不但是造血器官，它还是重要的免疫器官。骨髓是存在于长骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨质间的网眼中，是一种海绵状的组织，能产生血细胞的骨髓略呈红色，称为红骨髓。出生时，红骨髓充满全身骨髓腔，随着年龄增大，脂肪细胞增多，相当部分红骨髓被黄骨髓取代，后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓。骨髓单核细胞是一种未成熟的单核细胞，在骨髓细胞中约占0.04%，被认为是破骨细胞的前体细胞，较外周血单个核细胞诱导的破骨细胞得率高、全骨髓诱导法产生的破骨细胞数量多，纯度高，较脾细胞诱导法分化效率高。骨髓单核细胞(BMMNCs)是从股骨或胫骨骨髓中分离提取出来的原代细胞，它属干细胞类型。目前，大多数研究用淋巴细胞分离液分离提取骨髓单核细胞，近也有采用免疫磁珠分离法分离骨髓单核细胞。 |
原代细胞实验步骤：
一、取7-10d雄性SD大鼠，颈椎脱臼处死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超净工作台中，将大鼠断头置于玻璃培养皿中，打开颅腔后取出全脑,放在盛有预冷的PBS玻璃培养皿中，去除小脑和间脑。
三、将大脑半球在干滤纸上缓慢滚动以去除软脑膜和脑膜大血管，再放在新的盛有预冷的PBS玻璃培养皿中。
四、用细解剖镊去除大脑白质、残余大血管和软脑膜，保留大脑皮质。
五、大脑皮质放于DMEM中，剪碎成约1mm3大小，放入50ml的离心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型胶原酶，0 .025-0 .05％IV型胶原酶，200-400U DNaseI)，混匀后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室温1 000×g离心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重悬浮，充分混匀，1 000×g，20min，4℃离心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的胶原酶/分散酶，0.05-0.1％I型胶原酶，100-300U DNaseI )重悬浮，混匀，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室温离心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培养液悬浮混匀，铺于经离心形成连续梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃离心10min。
十、靠近底部的红细胞层之上的白黄色的层面即为纯化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗两次(离心1000×rpm，6min，室温)，去上清液。
加入DMEM培养液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重悬浮，接种于含5％的大鼠 血清37℃孵育过夜所制备的细胞培养皿中，置于37℃、5％CO2培养箱内静置培养24h后更换不含嘌呤霉素的混合培养基，随后隔天换液。
原代细胞使用方法：
是一种贴壁细胞，细胞形态呈巨噬细胞样，在技术部标准操作流程下，细胞可传2-3代；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml培养基终止消化；
3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
4)待细胞贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的培养基。
3. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml培养基终止消化；
3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml培养基重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；
4)待细胞贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的培养基(37℃预热)。
5)原瓶内贴壁细胞按正常消化处理。
4. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
公司正在出售的产品：
抗抗人垂体泌乳素杂交瘤细胞；PRL1
抗精核蛋白；HP1
抗精核蛋白；HP2
抗精核蛋白；HP3
抗小鼠杂交瘤细胞；D7
抗孕酮杂交瘤细胞；P01
抗睾酮小鼠杂交瘤细胞；T01
抗人绒毛膜促性α杂交瘤细胞；H80X
人胚肺二倍体细胞；2BS
人胚肺成纤维细胞；MRC-5
抗人绒毛膜促性b杂交瘤细胞；H10X
抗人绒毛膜促性杂交瘤细胞；HN4
人胚肾细胞；293[HEK-293]
中国仓鼠卵巢细胞K1(亚系克隆)；CHO-K1
非洲绿猴肾细胞；VERO-76
赭绿青霉Penicillium ochrochloron
支气管炎鲍特氏菌Bordetella bronchiseptica
支气管炎博德特氏菌Bordetella bronchisptica
支气管炎博德特氏菌基因组DNAGenomic DNA from Bordetella bronchissptica
芝庇侬醋酸杆菌Acetobacter cibinongensis
枝孢菌属Cladosporium sp.
枝顶孢菌Acremonium dichromosporum
枝顶孢属Acremonium sp.
枝多头霉Polycephalomyces ramosus
直杆糖多孢菌Saccharopolyspora rectivirgula
兔骨髓单核细胞植物乳杆菌（胚芽乳杆菌）Lactobacillus plantarum
纸葡萄穗霉Stachybotrys chartarum
指甲绒黑粉类酵母Filobasidium uniguttulatum
指状青霉Penicillium digitatum
趾间毛癣菌Trichophyton interdigitale Priestley
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