Pfu DNA Polymerase

Pfu DNA Polymerase公司正在销售的产品：Anti-SCN2B Antibody小鼠孕/孕酮
Anti-SCN2B Antibody小鼠可溶性核因子κB受体活化因子配基
Anti-SCN4B Antibody大鼠脑钠素/脑钠尿肽
Anti-SCNN1D Antibody人抗Ku抗体
Anti-SCN7A Antibody人抗IgA抗体
Anti-SCN4A Antibody大鼠前列腺

产品分类：PCR相关

储存条件：—20℃,36个月

用途：高保真DNA聚合酶

注意事项：保真性高于普通Taq DNA聚合酶,附送10x PCR buffer。

公司产品仅用于科研具有质量可靠、效果稳定、灵敏度高、操作简单、易保存等特点，咨询并订购！

 

配制与标定的实验原理：

1、用EDTA二钠盐配制EDTA标准溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一种白色晶体粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室温溶解度为0.02g/100g H2O。

2、标定EDTA标准溶液的工作基准试剂，基准试剂的预处理：称量前一般应先用稀盐酸洗去氧化层，然后用水洗净，烘干。

配制步骤：

1、取适量锌片放在100mL烧杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自来水、纯水洗净，烘干、冷却。

2、用直接称量法在干燥小烧杯中准确称取0.15～0.2g Zn，盖好小表面皿。

3、用滴管从烧杯口加入5mL 1:1 盐酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地将溶液转移至250mL容量瓶中，用纯水稀释至标线，摇匀。

 

 

实验方法与判定：

1.对照品溶液的稳定性

2.对照品溶液的配制：精密量取脑对照品适量，加无水乙醇制成每1ml含脑1mg的溶液，作为对照品溶液。

3.色谱条件：以交联键合聚乙二醇为固定相的毛细管柱；柱温120℃；进样口温度250℃；检测器温度250℃；分流进样，分流比10:1。理论塔板数按脑计算应不低于10000。

4.实验方法：配制的对照品溶液，一份置冷处保存，一份置室温中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份对照品溶液，三种储备液同时稀释制成每1ml中约含50ug的溶液。照气相色谱法，并依据新对照品的峰面积计算原对照品溶液的含量。记录下来，保证原对照品溶液含量在考察期相对平均偏差不超过2.0%，验证对照品溶液在使用期内稳定可靠。

使用方法：

1.  常用筛选浓度

注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。

一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 杀灭曲线的建立

注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。

1）  第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。

2）  根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。

3）  第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。

4）  接下来每3-4天更换新的含药物培养基。

5）  按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

3.   稳定转染细胞的筛选

1）  转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。

注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%

2）  每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。

3）  筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。

4）   挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。

5）   之后更换正常培养基培养即可。

青霉核孔复合体蛋白抗体Human MMP14(Matrix metalloproteinase-14) ELISA Kit低密度脂蛋白受体(VLDLR)

血杆菌神经性因子ICP34.5（人单纯疱疹病Ⅰ型）抗体Human CYFRA21-1(CytokeRatin Fragment Antigen 21-1) ELISA Kit低密度脂蛋白(VLDL)

三叶胶灰星菌背板胶质乙酰酯抗体Human HE4(Epididymal Protein 4) ELISA Kit8(KLK 8)

假灰链霉菌神经PAS结构域蛋白3抗体Human NSE(Neuron-specific Enolase) ELISA Kit7(KLK 7)

佛雷德里克斯堡假单胞菌神经增殖和分化调控蛋白1抗体Human PCT(Procalcitonin) ELISA Kit6(KLK 6)

戴尔福特菌属NOTCH调节锚蛋白抗体Human U-II(Urotensin 2) ELISA Kit2(hK 2)

大肠埃希氏菌神经囊泡膜蛋白1抗体Human CK-MB(Creatine Kinase MB) ELISA Kit11(KLK 11)

长根静灰球菌突触生长相关蛋白抗体Human GHRL(Ghrelin) ELISA Kit10(KLK 10)

虎掌菌*NDUFA9蛋白抗体Human VEGF(Vascular Endothelial Cell Growth Factor) ELISA Kit1(KLK 1)

枯草芽孢杆菌间变性淋巴瘤激核相互作用伴侣蛋白抗体Human VEGF-C(Vascular Endothelial Growth Factor C) ELISA Kit激敏感脂肪(HSL)

传染性支气管炎病磷化间变性淋巴瘤激核相互作用伴侣蛋白抗体Human TNFRSF13C/BAFFR(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13C) ELISA Kit激敏感性脂肪(HSL)

Formosa核仁和纺锤体相关蛋白1抗体Human TNFRSF13B/TACI(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13B) ELISA Kit激活A(Activin A)

枯草芽孢杆菌心脏特异性同源盒转录因子NKX2.5抗体Human VEGFR2/KDR(Vascular endothelial growth factor receptor 2) ELISA Kit激动异构/分裂MB(CKMB)

隐花青鹅膏指(趾)关节粘连NOG蛋白抗体Human TNFRSF14/HVEM(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14) ELISA Kit基质衍生因子1β(SDF-1β/SDF1B)

艾高夫氏亮菌核小体结合蛋白1抗体Human TNFRSF4/OX40(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4) ELISA Kit基质衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)

粗壮假丝酵母轴突蛋白1(Neurexin 1α)抗体Human TNFRSF5/CD40(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5) ELISA Kit基质衍生因子1β(SDF-1β)

拟盘多毛孢Pestalotiopsis│sp. 质量规格：>95%,BR,M.W:4000冬凌草

发酵乳杆菌Lactobacillus│fermantum 质量规格：>98%丹参钠

: HBUM172298资源名称: 链霉菌 质量规格：HPLC≥98%,标准品隐丹参
Pfu DNA PolymeraseLAT(Mouse Linker for activation of T cell) ELISA Kit  小鼠T细胞活化连接蛋白规格： 48T

EMAb(Mouse Endometrium Antibody) ELISA Kit  小鼠抗子宫内膜规格： 48T

LDL-IC(Mouse LDL-IC) ELISA Kit  小鼠低密度脂蛋白免疫复合物规格： 48T

UU-Ab(Mouse Ureaplasma urealyticum antibody) ELISA Kit  小鼠解脲脲原体规格： 48T

GFAP(Mouse glial fibrillary acidic protein) ELISA Kit  小鼠神经胶质纤维suan性蛋白规格： 48T