核仁组成区嗜银-AGNOR染色技术服务

一.核仁组成区嗜银-AGNOR染色技术服务简介

核仁组成区(NORs)是染色体上的一个编码核糖体RNA(rRNA)的片段，存在于DNA特异性环上，凸向核仁。在电镜下，核仁组成区为在电子致密区中的境界不清的浅染区域。在石蜡切片上,在核仁中见到的每一个点状反应颗粒有可能代表多 个AgNOR位点。核仁组成区嗜银蛋白染色主要特点是操作简便、批量染色的较为经济, AgNOR位点的数量增加与细胞增殖性增加有关，对于良恶性肿瘤的鉴别具有一定的意义。

二、试剂配制

1. AgNOR染色液

甲液:明胶2 g溶于双蒸水至99 ml,在60°C使之*溶解，再加入纯甲酸1 ml摇匀待用。

乙液: AgNO350 g溶解于双蒸水中至100 ml, 4°C冰箱保存。

2. AgNOR工作液

取甲液10 ml,乙液20 ml临用前混合。

三、染色步骤

1.切片脱蜡至水

2.双蒸水洗2次

3.AgNOR工作液中(25°C) 浸染30分钟(暗处进行) (镜下观察)

4.脱水，透明，封固

5结果:油镜观察，细胞核及胞质背暴为淡黄色，AgNOR呈棕黑色颗粒状。

四、样本说明

1、 石蜡切片

取材: 1.组织离体后需及时固定; 2.组织标本不宜过大、过厚。

固定: 1.固定液: 10%福尔马林(4%Paraformaldehyde) 或10%中性甲醛: 2.用量: -般固定液的量与组织体积比为

10:1~20:1; 3. 固定:适宜的固定时间，主要根据材料的大小松密程度及固定液的穿透速度而定。

保存:切片经60°C烤片3-5小时后，可于常温或4°C干燥保存。

2.冰冻切片

取材:取材后需立即置于超低温冰箱或液氮中保存。

固定:样本冰冻切片后，应立即放入甲醇、acetone. 95%酒精、 4%Paraformaldehyde等固定液中固定。

保存:固定好的切片自然风干，密封后置于-80°C. -20°C保存， 尽快用于后续实验。

3.细胞块石蜡切片

细胞量较多的样品，可离心分离所需细胞，用中性甲醛固定后制作成琼脂细胞块，然后按照制作石蜡切片的操作流程进行切

片。

4、细胞爬片

在孔板里做的细胞爬片，爬片取出后，用PBS洗涤2次(根据研究目的，PBS洗涤可选择不做)。用4%Paraformaldehyde49C固定15分钟，将表面液体吹干，置于-20°C保存。若在短时间内即开展实验,可在加固定液后，于4°C冰箱中放置一段时间。

5.细胞涂片细胞涂片常用的固定液有95%酒精(为常用)、酒精 Glacial acetic acid solution. Ethyl ether-酒精液和

Carney's液等。

五、注意事项

1.常用的固定液为中性甲醛和4%Paraformaldehyde, 能使大多数抗原保存良好，适用于免疫组织化学。

2.病理实验切片好是防脱片，以免实验过程中出现掉片。若客户提供切片，应告知切片有无防脱处理。

3.骨组织、皮肤组织或脂肪含量较高的样本,实验过程中有较高的掉片几率。

4.客户可提供组织块(以10%福尔马林、4%Paraformaldehyde或10%中性甲醛固定， 如组织块极小请事先说明) . 蜡块

或切片(使用免疫组化切片，以避免实验过程中掉片)

5.待检测蛋白的种属、实验分组情况及实验背景资料、其他具体要求等需事先说明。

6.若客户提供骨组织或钙化程度较高的组织进行实验，需进行脱钙处理。

7.浸泡在固定液中的组织样本，在运输中容器需密封，防止破碎、渗漏。

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